| RAPA HiFi DNA聚合酶，其來(lái)源于高保真DNA聚合酶，并加入了增強(qiáng)的延伸結(jié)構(gòu)，使其具有超保真性能（~280倍Taq）、長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力、高產(chǎn)量。長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力，使用該酶可輕松擴(kuò)增8kb的基因組DNA、20kb的λDNA、8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的延伸速度。該酶具有5’-3’的聚合酶活性、強(qiáng)3’-5’的外切酶活性，產(chǎn)物為平末端。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
主要特征 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
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組分 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
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單位定義 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 一個(gè)活力單位即在在74°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
儲(chǔ)存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于4°C（3個(gè)月）保存。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
使用方法 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1.按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻： 2xRAPA HiFi Buffer 12.5 μl RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl) 0.25 μl dNTP Mixture (10 mM each) 0.25 μl 上游引物(10 μM) 1 μl 下游引物(10 μM) 1 μl *模板DNA 1-250 ng ddH2O up to 25 μl | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| *模板DNA用量參數(shù)(25 μl反應(yīng)體系,目的片段≤20kb) 5-250 ng Genomic DNA 0.1-10 ng Plasmid DNA 1-2 μl cDNA from RT reaction | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2. PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
（1）擴(kuò)增片段<5kb時(shí)采用如下程序
| （2）擴(kuò)增片段>5kb時(shí)采用如下程序
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| 3.注意事項(xiàng) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| （1）當(dāng)模板GC含量>65%時(shí)，請(qǐng)?zhí)砑?×Q-Solution（Cat. No.: A3002）。 （2）當(dāng)擴(kuò)增片段<1kb時(shí)，延伸時(shí)間可直接使用15s，當(dāng)擴(kuò)增片段>5 kb時(shí)，按照2-3 kb/min的延伸時(shí)間進(jìn)行設(shè)置，能獲得更高的產(chǎn)量。 （3）由于不同的PCR管其導(dǎo)熱性能有所不同，通常PCR采用25 μl體系可以獲得更高的產(chǎn)量。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
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