| Bsu DNA聚合酶是具有鏈置換活性的DNA恒溫?cái)U(kuò)增聚合酶，主要應(yīng)用于RPA重組酶擴(kuò)增。重組酶UvsX與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列；一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)，Bsu DNA聚合酶啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。 本Bsu DNA 聚合酶來源于 嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus subtilis），系將Bacillus subtilis DNA 聚合酶（Bsu） I 基因的前296個(gè)AA截去而得。該酶保留了Bsu I 的 5´-3´ 聚合酶活性，但是缺失了 5´-3´ 核酸外切酶結(jié)構(gòu)域，該酶自身缺失 3´-5´ 核酸外切酶活性，可用于重組酶擴(kuò)增。 | ||
應(yīng)用 | ||
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活性定義 | ||
| 在37℃條件下，30min內(nèi)參入10nmol酸性不容物定義為1個(gè)活性單位。 | ||
性能測試 | ||
| 按照如下體系配制反應(yīng)： Plasmid DNA 100 ng 10×Bsu Reaction Buffer 5 μl Random9 (100μM) 2 μl dNTP mixture(10 mM) 2 μl Rnase free H2O upto 50 μl 混勻后95℃ 5min，然后冰上放置5min，分別加入不同劑量Bsu DNA聚合酶（泳道1-2：0， 泳道3-4：0.5 μl， 泳道5-6：1 μl，泳道7-8：2 μl，泳道9-10：4 μl，），分別在25℃和37℃孵育3h，電泳檢測各組產(chǎn)物如下圖 | ||
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1X Bsu Reaction Buffer | ||
| 50 mM NaCl ，10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT | ||
儲(chǔ)存 | ||
| -20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融。 | ||
熱失活 | ||
| 75°C，20min。 | ||
注意事項(xiàng) | ||
| 1、由于缺乏3 ´-5 ´核酸外切酶活性，Bsu DNA 聚合酶不能切除 3´未配對(duì)的突出末端，因而不適用于生成平齊末端。 2、25℃ 時(shí) Bsu DNA 聚合酶 保留 50% 的活性，是同溫度下 Klenow 片段（3´-5´ exo-）的兩倍。 |
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