末端轉移酶(TdT)是一種不依賴于模板的DNA聚合酶,催化脫氧核苷酸結合到DNA分子的3’羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子 均可作為TdT的底物,加尾長度可達5~300nt。本酶經(jīng)電子重構架技術篩選,使其可以在45°C高溫下反應,從而避免因DNA二級結構造成的加尾效 率下降。優(yōu)化的活性中心結構,使其對模板底物結合能力更強,底物加尾比例更高。該末端轉移酶(TdT)廣泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修飾堿基(如 ddNTP,DIGdUTP)標記DNA 3’末端、TdT介導的dUTP 缺口末端標記技術(細胞凋亡的原位檢測)等試驗。 | |||||||||
組分 | |||||||||
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應用 | |||||||||
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活性定義 | |||||||||
37℃ 60分鐘內,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羥基末端中所需的酶量定義為1個活性單位 | |||||||||
儲存 | |||||||||
-20℃可保存3年。 | |||||||||
熱失活 | |||||||||
75°C 20min。 | |||||||||
注意事項 | |||||||||
1、適量EDTA可使Terminal Transferase的活性喪失。 2、金屬離子螯合劑,較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對Terminal Transferase活性具有抑制作用。 | |||||||||
功能測試(該實驗結果來自實驗室,未經(jīng)允許,不得轉載) | |||||||||
1. TDT不同底物的加尾效率分析 | 2. 不同酶量和不同溫度下加尾長度分析 | ||||||||
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