| 由于miRNA(microRNA)分子序列較小，僅20nt左右，沒有真核生物特有的Poly(A)尾巴結構，采用傳統(tǒng)Oligo dT引物和隨機引物很難獲得從miRNA到cDNA的反轉錄產物。目前普遍采用的解決方案有兩種：特異性反轉錄引物（圖1A所示）、兩步加A法反轉錄方案（圖1B所示）。 HaiGene公司開發(fā)出一套全新的一步法miRNA反轉錄試劑盒，基于Peter改良的miR-Q技術，可以對成熟的miRNA同時完成Poly(A)反應和反轉錄反應，直接獲得含有特異性tag和15(T)的cDNA產物（如圖2所示）。該方法使得miRNA反轉錄與mRNA的反轉錄一樣輕松,直接將提取的microRNA與反應緩沖液混合物混合并置于PCR儀上1小時即可獲得高濃度的、包含所有miRNA分子的cDNA產物,獲得的cDNA產物適合于采用SYBR Green染料法進行RealTime PCR進行定量檢測。 | ||||||||||
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組分 | ||||||||||
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| 注：如4XOne step miRNA RT Solution出現沉淀屬正�，F象，可用手捂化，混合均勻后使用不影響實驗結果。 | ||||||||||
一步法microRNA反轉錄原理 | ||||||||||
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儲存 | ||||||||||
| 請置于-20°C，可保存2年；避免反復凍融。 | ||||||||||
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