SUMO蛋白酶,也稱為UIP蛋白酶,是一種具有較高活性的半胱氨酸蛋白酶,來源于酵母編碼的MIP1基因,其特異性識別UBL蛋白的三級結構-SUMO(Small Ubiquitin-Like Modifier)。SUMO蛋白酶能夠識別完整的SUMO序列,并依賴正確的蛋白質構象,僅有完整的序列,沒有正確的結構,SUMO酶是不能對目標蛋白進行切割的。因此,該酶是目前切割特異性最好的蛋白酶,可在較廣泛的作用溫度和PH范圍(pH7-9)內發(fā)揮作用,切割的最佳溫度為30°C。SUMO蛋白酶的識別序列如下,切割位點位于QIGG之后 SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG 本公司生產的SUMO蛋白酶含有雙His標簽,酶切后,可通過Ni-NTA Resin親和純化,很容易地將SUMO去除。雙His標簽保證了,SUMO蛋白酶高親和力的結合Ni-NTA,以最大限度的去除SUMO蛋白酶。該SUMO蛋白酶分子量約26kD,比活>10E5/mg。 | ||||||||||
組分 | ||||||||||
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單位定義 | ||||||||||
在1XSUMO Protease Buffer-Salt (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C反應1h,剪切>85%的2 μg對照底物所需要的酶量定義為一個活性單位。 | ||||||||||
應用 | ||||||||||
融合蛋白標簽剪切去除。 | ||||||||||
儲存 | ||||||||||
SUMO蛋白酶置于-70°C可保存2年;-20°C可保存6個月,避免反復凍融;10×SUMO Buffer置于-20°C保存即可。 | ||||||||||
實例 | ||||||||||
Fig: 分別用2μl和5μl的SUMO蛋白酶(C0801)對100 μg SUMO酶切對照融合蛋白(C0801P)進行酶切1h或3h,如圖所示。M:Protein Marker,泳道1:純化后的SUMO-A蛋白; 泳道2:2μl SUMO Protease 酶切1h產物;泳道3:5μl SUMO Protease 酶切1h產物; 泳道4:2μl SUMO Protease 酶切3h產物;泳道5:5μl SUMO Protease 酶切3h產物。 |
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