| LAMP是一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù)，采用4或6條能夠識別目的基因上的6個(gè)特異區(qū)域的引物，依賴于Bst DNA聚合酶的強(qiáng)鏈置換活性，在30~60分鐘內(nèi)DNA擴(kuò)增可達(dá)109~1010倍。 LAMP檢測方法分為多種，包括染料法、濁度法、電泳法以及我司最新開發(fā)的TaqMan熒光探針法。我司推出基于LAMP常用檢測方法的凍干LAMP檢測通用試劑盒，該系列產(chǎn)品為凍干制品，相對于市面上的液體型產(chǎn)品更加穩(wěn)定，靈敏度更高，操作更加方便，通常在30min內(nèi)完成檢測。 LAMP變色擴(kuò)增試劑盒包括：凍干LAMP-HNB變色擴(kuò)增試劑盒、凍干LAMP橙綠變色擴(kuò)增試劑盒、凍干LAMP濁度擴(kuò)增試劑盒和凍干LAMP-TaqMan擴(kuò)增試劑盒。其中 羥基萘酚藍(lán)（HNB）是一種金屬離子指示劑，HNB與鎂離子結(jié)合使得反應(yīng)體系初始顏色為紫羅蘭色，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，Mg2+與析出的焦磷酸根離子反應(yīng)生成焦磷酸鎂沉淀，羥基萘酚藍(lán)失去了鎂離子使得體系顏色變?yōu)樘焖{(lán)色，而未反應(yīng)的體系則仍保持著紫羅蘭色 ；而橙綠變色染料（OG Dye）則可與LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合成明顯的肉眼可見的熒光綠色，陰性反應(yīng)則為橙色；濁度法則是由濁度儀檢測或肉眼觀察LAMP劇烈反應(yīng)產(chǎn)生的焦磷酸鎂沉淀而判斷反應(yīng)結(jié)果;而LAMP-TaqMan則是由熒光檢測儀器實(shí)時(shí)分析反應(yīng)而判讀結(jié)果。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
LAMP方法比較 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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儲存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 所有制品為凍干形式，在未溶解前，該制品可-20℃長期保存，并可室溫運(yùn)輸，性能無下降。使用LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余試劑可在-20℃保存1個(gè)月，在-60℃以下長期保存。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
實(shí)例 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 以檢測非洲豬瘟病毒（ASFV）為例，以標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒為模板，分別用橙綠變色、HNB顯色和濁度方法檢測，結(jié)果如下圖。
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| LAMP引物設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指南 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
注意事項(xiàng) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| (1). 為了減少交叉污染，請分區(qū)操作（試劑和模板DNA的配置操作最好在不同區(qū)域中進(jìn)行）。 (2). 實(shí)驗(yàn)時(shí)，所需模板量取決與樣品類型（0.1 ng~100 ng），可先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定模板量。 (3). 各區(qū)物品均為專用，不可交叉使用，防止污染。 (4). 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)穿工作服，帶手套，建議使用帶濾芯的一次性吸嘴。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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