全血蛋白提取試劑盒
貨號：EX1200
規(guī)格：50T/ 100T
有效期：2-8℃保存，有效期一年
產(chǎn)品內(nèi)容：
1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。注：
2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成 液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3. 試劑拆封后請盡快使用完！
產(chǎn)品簡介：
全血蛋白提取試劑盒適用于從各種動物抗凝/非抗凝全血樣品中提取總蛋白。
本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質(zhì)膜、核膜和各種細胞器膜。本 試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、 Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有EDTA ，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳。也可以將最后樣品用脫 鹽柱脫鹽處理后再用于2D電泳。
自備試劑和儀器
離心機、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸 頭、一次性手套
產(chǎn)品特點：
1 、使用方便，將蛋白提取的時間縮短至 30 分鐘。
2 、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3 、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4 、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨 立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成 使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白 酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
使用方法：
一、使用注意事項：
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開 蓋時試劑損失。
3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
5. 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
6. 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸 酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。
10. Western Blot實驗內(nèi)參可以選用beta-actin 、GAPDH 、Tubulin。
二、操作步驟
1. 提取液準備：
每500μl冷的總蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。 【注】：
根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。 
加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
蛋白樣品用于測定某些細胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實驗時，注意根據(jù)實際情況調(diào)整抑制
劑混合物是否加入。
以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2 ．取 300μl 全血樣本，加入 300μl 蛋白提取液，充分混勻后，在 4℃條件下振蕩 20-40 分鐘。 【注】：
使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。
沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻
即可。
3. 在 4℃ ，14000×g 條件下離心 10 分鐘。
4. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到全血蛋白。
【注】：
一般沉淀只是離心管底部薄薄一層。沒有明顯團塊。
整個紅色液體即是全血蛋白上清液。
5. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span> 【注】：
建議用 BCA 法進行蛋白定量。
蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。 
全血樣品蛋白濃度較高，需要稀釋后用于下游實驗。
注：
1. 用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如 果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
2. 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞， 蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
注意事項：
1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清 除殘留清潔劑。
3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。
4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
