產(chǎn)品概述 product description
組織活性氧檢測試劑盒（紅色熒光O08）是一種利用新型熒光探針 O08進行組織活性氧檢測的試劑盒。本試劑盒中的 O08 ROS探針為紅色熒光的活性氧探針，具有516 nm / 606 nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。O08 ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成紅色熒光物質(zhì)，紅色熒光強度與組織內(nèi)活性氧水平成正比，檢測O08產(chǎn)物的熒光強度就可以知道組織內(nèi)活性氧的水平。 在激發(fā)波長510 nm，發(fā)射波長610 nm附近，使用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀等儀器檢測O08產(chǎn)物熒光強度，從而測定組織內(nèi)活性氧水平。 一般最好使用新鮮組織樣本檢測活性氧，反映的是組織當(dāng)時的活性氧狀態(tài)。凍存的組織樣本的ROS在長期凍存過程中會損失掉，有條件的話就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的組織樣本。已經(jīng)凍存的組織樣本中殘余的ROS也可以用本試劑盒檢測。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括過氧化氫（H2O2，Hydrogen peroxide）、羥基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、單線態(tài)氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧陰離子(•O2-，Superoxide anion)、過氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、過氧羥自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游產(chǎn)物過氧化物過氧亞硝基陰離子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羥化物等，參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。 活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生主要是氧化磷酸化的結(jié)果，在呼吸鏈中，在某些位點會有“泄露”的電子直接和氧氣或和其他電子受體反應(yīng)，在酶或非酶作用下引發(fā)一系列反應(yīng)生成不同種類的活性氧：“泄露”的電子最初和氧氣反應(yīng)生成超氧陰離子自由基（O2•-）（圖1A）。超氧陰離子遇水生成H2O2（圖1B），同時過氧化氫也可由氧氣在單胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）的作用下生成（圖1C），生成的過氧化氫在髓過氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）的催化下與Cl-反應(yīng)可生成ClO-（圖1D），在鐵或銅離子的催化下發(fā)生Fenton反應(yīng)生成OH•（圖1E），超氧陰離子遇氮氧化物反應(yīng)生成ONOO-（圖1F）。這些生成的高氧化活性的物質(zhì)統(tǒng)稱為活性氧。O系列活性氧探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對樣品進行多色標(biāo)記實驗。除了本試劑盒的紅色熒光探針可以提供綠色、藍(lán)色、深紅色熒光的活性氧檢測試劑盒。 提供各種細(xì)胞樣本、切片樣本、組織樣本的活性氧、活性氮檢測試劑盒產(chǎn)品。 可以為您提供總活性氧、總活性氮和各種亞型的活性氧/活性氮的檢測試劑盒產(chǎn)品。 提供各種綠色、紅色、藍(lán)色、深紅色的活性氧/活性氮檢測試劑盒產(chǎn)品。提供各種細(xì)胞分析試劑盒。包括細(xì)胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、膜流動性、膜電位、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、胞外酸化、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種細(xì)胞檢測試劑盒產(chǎn)品。
2.可以根據(jù)需要分裝后凍存。
3.探針為DMSO溶液，在2-8℃時是固體狀態(tài)，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
2.背景低，靈敏度高；
3.線性范圍寬，使用方便。
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸頭
3.一次性手套
4.熒光檢測專用黑色96孔板
3.08染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
4.盡量縮短探針標(biāo)記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。
5.原位檢測必須使用熒光檢測專用的黑色透明底96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
6.以下操作步驟僅供參考，請根據(jù)實際樣本情況調(diào)整或參考文獻。
根據(jù)樣本數(shù)量，用純水將O08探針10倍稀釋。充分混勻，備用。
樣本處理：
1. 剛?cè)〉玫男迈r組織樣本用PBS洗凈。
2. 準(zhǔn)確稱取50 mg或100 mg組織樣本，加入500 μl-1 ml勻漿緩沖液A，用勻漿機/勻漿器充分勻漿。
3. 在100×g，4℃離心5分鐘，取上清備用。
樣本檢測：
1. 在96孔板中加入190微升勻漿上清液、10微升O08探針，用移液器吹打，使之充分混勻。
2. 在37℃避光孵育20-30分鐘。
3. 置于酶標(biāo)儀中，激發(fā)波長為488-535 nm、發(fā)射波長606 nm檢測熒光強度。
蛋白定量：
1. 另取50微升上清勻漿液，用PBS大約稀釋30倍。
2. 取100微升進行蛋白定量。
結(jié)果處理：
以熒光強度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氧強度。
