磁珠法土壤&糞便基因組 DNA 抽提試劑盒
產(chǎn)品編號(hào)：B618763
包裝規(guī)格：50 次/100 次
試劑盒組成
組分 50 次
100 次
Buffer CZ
35 mL
70 mL
Buffer SDS
4 mL
8 mL
Buffer SP
10 mL
20 mL
Buffer HTC
12 mL
24 mL
Buffer GA
60 mL
120 mL
Buffer P3
70 mL
140 mL
PureMag Beads
2 mL
4 mL
TE Buffer（pH8.0）
10 mL
20 mL
操作手冊(cè)
1 份
1 份
保存方法及注意事項(xiàng)
試劑盒中 Buffer HTC 和 PureMag Beads 置于 2~8°C 保存，其余試劑室溫保存，有效期詳見包裝。
Buffer SDS 中含有刺激性化合物，操作過程中應(yīng)穿上實(shí)驗(yàn)服，戴好乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，防止吸入口
鼻。沾染皮膚或眼睛后，請(qǐng)立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)生的幫助。
產(chǎn)品介紹
1
磁珠法土壤&糞便基因組 DNA 抽提試劑盒是一種土壤&糞便基因組 DNA抽提試劑盒。本產(chǎn)品采用 Buffer CZ 和
Buffer SDS 兩種溶液裂解土壤和糞便中的
微生物，
釋放出土壤和糞便中的微生物基因組 DNA。本試劑盒中的 Buffer HTC 是
一種腐殖酸清除劑，與 Buffer SP
共同作用，能夠清除大部分的腐殖酸和蛋白等雜質(zhì)。另外，PureMag Beads 選擇性吸附
DNA 分子，對(duì)腐殖酸和蛋白等雜質(zhì)的吸附量很少，通過多次洗滌液的洗滌能夠完全除去
PureMag Beads吸附的少量雜質(zhì)。在洗脫液的作用下PureMag Beads釋放吸附的基因組DNA，即獲得高質(zhì)量的基因組DNA。
采用本產(chǎn)品提取土壤和糞便基因組 DNA 無需苯酚、氯仿抽提，也無需蛋白酶 K 裂解，獲得 DNA 的 OD260/OD280 比值一般為
1.7~1.9，抽提的 DNA 可直接用于后續(xù) PCR 等實(shí)驗(yàn)。
標(biāo)準(zhǔn)抽提步驟
自備材料：磁力架、小型高速離心機(jī)（最大離心力 ≥ 12,000 × g）、水浴鍋、1.5 mL 和 2 mL 離心管、70% 乙醇、RNase A 溶
液（10 mg/mL）。
每次使用前請(qǐng)檢查 Buffer SDS 是否出現(xiàn)沉淀，如有沉淀，請(qǐng)于 65 °C 溶解之后使用。
.
樣品裂解：
a. 土樣裂解：稱取 250 mg 的土樣，加入 600 μl Buffer CZ 和 60 μl Buffer SDS，振蕩混勻 3 min，65°C 水浴 20 min，間
或混勻。
b. 糞便裂解：稱取 200 mg 固體糞便樣本，加入 600 μl Buffer CZ 和 60 μl Buffer SDS，振蕩混勻 3 min，65°C 水浴 20 min，
間或混勻。
c. 水樣裂解：采用微孔濾膜或者微孔濾紙（
0.22 μm 或者 0.45 μm）過濾水樣，水樣的用量依據(jù)水中微生物的含量而定。
然后將微孔濾紙或者濾膜剪碎之后加入 600 μl Buffer CZ 和 60 μl Buffer SDS，振蕩混勻 3 min，65°C 水浴 20 min，間
或混勻。
¸
加入裂解液之后充分振蕩土樣，使其呈現(xiàn)勻致狀態(tài)。
¸
裂解過程間或混勻，使其充分裂解。
¸
若糞便樣本為液態(tài)狀，加入 200 μl 樣品到離心管中，然后按照固態(tài)糞便裂解方法進(jìn)行裂解。
¸
若水樣比較渾濁，可以將水樣低速離心，然后取上清再進(jìn)行微孔濾膜過濾。
2.
12000 rpm室溫離心3 min，吸取上清至一干凈2 mL的離心管中。
¸
如需得到無 RNA 的 DNA，可在水浴后加入 20 μl RNase A (10 mg/mL),混勻后室溫放置 3-5 min。
3.
加入上清1/4體積的Buffer SP和200 μl Buffer HTC，漩渦混勻，-20°C放置15 min，間或混勻。
¸
Buffer HTC 是腐殖酸清除劑，使用前將沉淀充分懸浮起來再吸取。
4.
12000 rpm室溫離心5 min，吸取上清至一干凈2 mL離心管中。
5.
加入900 μl Buffer GA和40 μl PureMag Beads，充分混勻，室溫結(jié)合3 min，間或混勻。
¸
向離心管中加 PureMag Beads 之前，請(qǐng)將其充分混勻。
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請(qǐng)務(wù)必將 PureMag Beads 加至液面以下，盡量將槍頭上殘留 PureMag Beads 吸打干凈。
6.
將離心管置于磁力架上1 min，待PureMag Beads完全吸至管壁之后，吸棄上清，從磁力架上取出離心管。
¸
吸棄上清前，若管口粘有少量 PureMag Beads，請(qǐng)用上清液將其洗至離心管內(nèi)，以確保所有 PureMag Beads 吸附至管
壁上。
¸
吸棄上清時(shí)，請(qǐng)勿吸入 PureMag Beads，盡量吸凈上清。
¸
從磁力架上取出離心管后，若有少量上清，請(qǐng)將離心管置于磁力架上，再次吸取上清。
7.
向離心管中加入700 μl Buffer P3，振蕩混勻，將離心管置于磁力架上1 min，待PureMag Beads完全吸至管壁之后，吸
棄上清，從磁力架上取出離心管。
¸
吸棄上清前，若管口粘有少量 PureMag Beads，請(qǐng)用上清液將其洗至離心管內(nèi)，以確保所有 PureMag Beads 吸附至管
壁上。
¸
吸棄上清時(shí)，請(qǐng)勿吸入 PureMag Beads，盡量吸凈上清。
¸
從磁力架上取出離心管后，若有少量上清，請(qǐng)將離心管置于磁力架上，再次吸取上清。
8.
向離心管中加入700 μl 70%乙醇，振蕩混勻，將離心管置于磁力架上1 min，待PureMag Beads完全吸至管壁之后，吸
棄上清，從磁力架上取出離心管。
9.
重復(fù)步驟8一次，室溫開蓋干燥15-20 min或者55°C恒溫箱開蓋干燥5-7 min至管內(nèi)無液體殘留。
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干燥前，請(qǐng)盡量吸凈管內(nèi)的液體。
¸
干燥前，若出現(xiàn)液體掛壁現(xiàn)象，可將離心管短暫離心之后，再將其置于磁力架上，待所有 PureMag Beads 完全吸至管
壁之后再吸凈管內(nèi)液體。
10. 加入50 μl TE Buffer (pH 8.0)，65°C洗脫5 min，間或混勻。
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請(qǐng)將管壁上所有 PureMag Beads 懸浮在 TE Buffer 中。
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根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要可以將 TE Buffer（
pH8.0）用無菌的雙蒸水（
pH>7.5）代替。
11. 取出離心管并置于磁力架上1 min，待PureMag Beads完全吸至管壁上之后，吸取上清至新無菌的離心管，即獲得基因
組DNA。
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吸取上清前，請(qǐng)確保 PureMag Beads 完全吸至管壁，請(qǐng)勿吸入 PureMag beads，否則影響基因組 DNA 的純度。
常見問題解答
1.
得率低
a. 土壤樣品裂解不充分。土壤樣本中加入裂解液之后請(qǐng)務(wù)必充分振蕩混勻，使其呈勻致狀態(tài)，否則造成微生物包裹在土壤
顆粒中，造成微生物釋放率低，獲得基因組 DNA 濃度也偏低。另外，裂解過程間或混勻，使土壤保持懸浮狀態(tài)。
b. 結(jié)合不充分。加入 Buffer GA 和 PureMag Beads 之后，請(qǐng)將其充分混勻，并使 PureMag Beads 處于懸浮狀態(tài)。
c. 操作過程中丟失 PureMag Beads。結(jié)合及洗滌過程中可能有少量的 PureMag Beads 粘在離心管管口上，吸棄上清前請(qǐng)
用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的 PureMag Beads 也吸附至管壁上。
d. 洗脫液不合適。洗脫緩沖液的 pH 值對(duì)洗脫效率有影響，如果使用水進(jìn)行洗脫，請(qǐng)確保其 pH 值 > 7.5，pH 值過低可能
導(dǎo)致低洗脫效率。
e. 洗脫過程操作不當(dāng)。洗脫時(shí)請(qǐng)將管壁上所有 PureMag Beads 溶解在 TE Buffer 中。
f.
取樣量太多或者太少。請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書操作。
2.
獲得的DNA溶液有顏色
a. 取樣量過多。嚴(yán)格按照說明書操作，如果需要增加土壤用量，可以等比例增加后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟溶液的用量。
b. 裂解不充分。加入裂解液之后請(qǐng)充分懸浮土壤，保證微生物從土壤顆粒中釋放出來，使其裂解更充分。
c. 洗滌不充分。洗滌過程中請(qǐng)充分懸浮磁珠，保證磁珠洗滌干凈徹底。
d. 最后一步吸取上清時(shí)吸入 PureMag Beads。請(qǐng)確保所有 PureMag Beads 吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心
吸入 PureMag Beads，請(qǐng)將上清液放回原管，待 PureMag Beads 完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者將吸取的 DNA
溶液 10,000 rpm 離心 2 min，再取上清。
3.
獲得的DNA條帶彌散
a. 土樣不新鮮。請(qǐng)拿到土樣之后盡快抽提基因組，保證微生物的 DNA 完整性。
4.
DNA樣品不純，抑制或者干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)
a. 乙醇有殘留。請(qǐng)吸棄上清后從磁力架上取出離心管，放置 2 min 之后再將離心管置于磁力架上 30 s，吸凈管底的液體。
若出現(xiàn)殘液的掛壁現(xiàn)象，請(qǐng)短暫離心之后將離心管置于磁力架上 30 s，吸凈離心管內(nèi)的液體。
b. PureMag Beads 洗滌不充分。向離心管中加入 70 %乙醇以后，請(qǐng)充分混勻，使 PureMag Beads 充分懸浮在 70%乙醇
中。
c. PureMag Beads 沒有完全干燥。請(qǐng)將 PureMag Beads 完全干燥，保證無乙醇?xì)埩簟?/span>
d. 最后一步吸取上清時(shí)吸入 PureMag Beads。請(qǐng)確保所有 PureMag Beads 吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心
吸入 PureMag Beads，請(qǐng)將上清液放回原管，待 PureMag Beads 完全吸至管壁之后重新吸取上清�；蛘邔⑽〉� DNA
溶液 10,000 rpm 離心 2 min，再取上清。
e. 基因組 DNA 加量過多或者未加入 BSA。如果基因組 DNA 濃度過高，請(qǐng)將其稀釋至 20 ng/μl ，并在 PCR 反應(yīng)體系中
加入終濃度為 16 mg/mL BSA。
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