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人肥大細胞LUVA專用培養(yǎng)基

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簡介:

StemPro-34 SFM 是一種無血清培養(yǎng)基,專門配制用于支持人造血細胞在培養(yǎng)物中的生長,包括從骨髓、新生兒臍帶血和外周血中分離的 HSC 和祖細胞。

StemPro-34 SFM 是一種靈活的細胞培養(yǎng)基,可用于多種應(yīng)用。

細胞收到后處理

半貼壁、半懸浮細胞處理方法:

1、該細胞是半貼壁半懸浮生長,懸浮細胞用離心管收集細胞懸液,1000rpm 離心 5min,收 集上清(后期對比培養(yǎng)使用)。

2、當未超過 80%匯合度時,將離心收集到的懸浮細胞沉淀加入 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,加入 原培養(yǎng)瓶中,放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)。

3、超過 80%匯合度時,將貼壁細胞根據(jù)貼壁細胞傳代方法消化、離心、收集;將懸浮細胞 和貼壁細胞的沉淀用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸收集到一起,混勻后,按 1:2 進行分瓶傳代(2 個 T25)。

(傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基, 進行對比培養(yǎng)。)

(注意:如收到密封培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松)

凍存細胞到貨處理

1、收到細胞后,檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等 問題,請即時聯(lián)系。

2、將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或-80 度冰箱保存,建議盡早復(fù)蘇。

3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系,會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第 二管。特別說明:未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。

細胞復(fù)蘇

1、 從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;

3、棄上清,沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 T25 培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中 培養(yǎng);

4、第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞傳代 1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,收集 T25 培養(yǎng)瓶中的懸浮細胞培養(yǎng)液,1000rpm 離心 5min;

2、貼壁細胞用 PBS 清洗一次,添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡 下觀察,待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)基終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后 將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;

3、棄上清,將懸浮細胞和貼壁細胞的沉淀用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸收集到一起,混勻后, 按 1:2 進行分瓶傳代(2 個 T25)。補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,最后放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,收集 T25 培養(yǎng)瓶中的懸浮細胞培養(yǎng)液,1000rpm 離心 5min;

2、用 PBS 清洗細胞一次,添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀 察,待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)基終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸 液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;

3、 棄上清,將懸浮細胞和貼壁細胞沉淀加入 1ml/支的雅吉無血清凍存液(7001),重 懸收集到一起,混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液)

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱 存放 24 小時以上。

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