描述：
從新鮮和/或冷凍組織中獲得優(yōu)質(zhì)細(xì)胞懸浮液是后續(xù)實(shí)驗(yàn)的重要步驟，如流式細(xì)胞術(shù)分析 (FACS)和核酸純化。細(xì)胞懸浮液可以通過以下一種或三種方法從組織中分離出來:化學(xué)組織分 離、酶消化和物理分離。許多方法都過于繁瑣和費(fèi)時(shí)。最重要的是 ，組織中尤其是冷凍組織中 的細(xì)胞，通常被破壞，表現(xiàn)出低完整性和低活性。很難從結(jié)締組織含量較高的冷凍樣品中獲取 得高活性的細(xì)胞懸液，例如肝、腎、腦組織等。我們開發(fā)的這款試劑盒，簡單、快速、高效、 無需特殊儀器，利用化學(xué)和物理分離機(jī)制將細(xì)胞從新鮮或冷凍的組織中分離出來。該試劑盒可
在20分鐘內(nèi)完成，可獲得具有較高完整性和活性的細(xì)胞懸液。
應(yīng)用：
用該試劑盒獲得的細(xì)胞懸液可以用于 FACS 分析和其他應(yīng)用。
試劑盒組分(50T):
1. 組織分離液 15ml
2. 1.5ml 離心管 50 個(gè)
3. 1.5ml 離心管的研磨杵 2 個(gè)
儲(chǔ)存： 常溫運(yùn)輸， 4 度儲(chǔ)存。
所需附加材料
臺(tái)式離心機(jī)
FACS 緩沖液 (1XPBS 中加入 5%牛血清白蛋白， 0.01%疊氮化鈉)
40- 100um 的細(xì)胞篩選
操作方法： (將組織分離液和 FACS 緩沖液冰上預(yù)冷)
1. 取10-30毫克的組織置于試劑盒提供的1.5 ml離心管中。加入200μl預(yù)冷的組織分離液覆蓋組織，冰上孵育5- 10分鐘。使用提供的研磨杵反復(fù)扭轉(zhuǎn)研磨組織100 – 200次(這個(gè)過程大約 2-3分鐘)。研磨杵可重復(fù)使用，用清水清潔后，用紙巾擦干即可。不建議使用自備的 1.5ml離心管，因?yàn)槠渌?.5ml離心管和試劑盒提供的研磨杵可能不匹配。
2. 研磨后， 500Xg，離心3分鐘，棄去上清液。用研磨杵將沉淀扭轉(zhuǎn)研磨100- 150次。研磨杵放在管中，加入1ml的FACS緩沖液，將樣品再研磨幾次重懸。如前所述清潔并擦干研磨 杵，以供將來使用。
3. 用1ml的吸頭上下吹打10 – 20次重懸細(xì)胞。將細(xì)胞懸液過40 - 100μm細(xì)胞篩(細(xì)胞篩的孔徑根據(jù)最終所需細(xì)胞大小選擇)。用低速離心(500Xg, 3min)收集細(xì)胞，再用適量的FACS緩沖 液重懸細(xì)胞。 不要使用PBS重懸細(xì)胞，因?yàn)榧?xì)胞非常脆弱。如果細(xì)胞不在FACS緩沖液或 其他含血清的緩沖液(例如：含有10- 20%胎牛血清的組織培養(yǎng)基)中重懸，細(xì)胞的活力將 受到顯著影響。
