產(chǎn)品概述 product description
缺氧是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中普遍存在的現(xiàn)象,其產(chǎn)生主要與腫瘤無限制生長、氧耗增加、血供不足及腫瘤組織血管發(fā)育不良等有關(guān),也是臨床多種疾病共有的病理過程。缺氧環(huán)境下的腫瘤細(xì)胞易發(fā)生轉(zhuǎn)移,并且能增加對放療、化療的抗拒性,從而降低了治療效果。因此,研究缺氧的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律,對臨床治療、增強(qiáng)機(jī)體代償適應(yīng)能力都有重要意義。 細(xì)胞缺氧通�？蓪�(dǎo)致胞內(nèi)的硝基還原酶(Nitroreductase,NTR)的增加。在缺氧條件下，以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Reduced nic-otinamide adenine dinucleotide,NADH)作為電子供體，細(xì)胞內(nèi)的硝基還原酶可催化多種外源硝基芳香族化合物發(fā)生單電子轉(zhuǎn)移，生成硝基陰離子自由基，隨后進(jìn)一步被還原成羥胺或氨基。 細(xì)胞缺氧通常通過HIF蛋白表達(dá)、基因表達(dá)、細(xì)胞活性等方法檢測，但是這些方法比較麻煩，對實(shí)驗(yàn)操作的熟練程度要求，O91細(xì)胞缺氧檢測試劑盒通過細(xì)胞缺氧后的氧化應(yīng)激反應(yīng)檢測細(xì)胞的缺氧損傷，能夠簡單快捷的反映的細(xì)胞缺氧損傷的情況。 O91細(xì)胞缺氧檢測試劑盒是一種利用O91綠色熒光探針進(jìn)行細(xì)胞缺氧狀態(tài)檢測的試劑盒。 O91熒光探針可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并與細(xì)胞內(nèi)的缺氧損傷產(chǎn)物反應(yīng)，形成綠色熒光產(chǎn)物，產(chǎn)生綠色熒光。綠色熒光隨著缺氧程度的增加而增強(qiáng)。因此，根據(jù)活細(xì)胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞缺氧的變化。用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接檢測觀察，是一種快速簡便的細(xì)胞中缺氧變化的檢測方法。 O91在激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長526 nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測熒光，從而測定細(xì)胞內(nèi)缺氧狀況。 本試劑盒可以用于各種真核培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)或灌流組織及組織冰凍切片的檢測。 O9系列缺氧檢測熒光探針有各種顏色可供選擇，除了本試劑盒的綠色熒光探針外，還可以提供紅色、橙色、紫色等不同試劑盒選擇。 可以提供細(xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動(dòng)性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測試劑盒產(chǎn)品。 可以為您提供各種顏色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細(xì)胞、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。 可以提供動(dòng)物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標(biāo)檢測的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品。
2.探針需密封保存。減少開蓋次數(shù)。
3.避免反復(fù)凍融�？梢愿鶕�(jù)需要分裝后凍存。
4.探針液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
5.可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
6.試劑拆封后請盡快使用完！
2.背景低，靈敏度高；
3.線性范圍寬，使用方便。
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.離心管
3.吸頭
4.一次性手套
2.熒光探針在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會導(dǎo)致背景較高。
4.探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。
5.盡量縮短探針標(biāo)記后到測定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。
6.O91在光照和空氣中易被氧化，注意避光密封保存。
7.對不同的細(xì)胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度，以觀察缺氧的變化。
原位標(biāo)記：僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。
1. 按照1:1000-10000用無血清培養(yǎng)基稀釋O91探針。
2. 去除細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS洗細(xì)胞一次。
3. 加入適當(dāng)體積稀釋好的O91探針。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜，通常對于96孔板每孔加入200 μl染色液，六孔板的一個(gè)孔加入稀釋好的BO91探針不少于1毫升。
4. 在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育10-60分鐘。
5. 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的O91探針。
6. 用PBS重懸細(xì)胞。
7. 檢測細(xì)胞熒光。
收集后標(biāo)記：懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞消化處理
1. 按照1:1000-10000倍用無血清培養(yǎng)基稀釋 O91探針。
2. 離心移除培養(yǎng)基，用PBS洗細(xì)胞一次。
3. 細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的O91探針中，細(xì)胞濃度為1*106-2*107/毫升，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育10-60分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細(xì)胞充分接觸。
4. 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的O91探針。
5. 用PBS重懸細(xì)胞。
6. 檢測細(xì)胞熒光。
共聚焦/熒光顯微鏡/酶標(biāo)儀檢測：
1. 對貼壁生長細(xì)胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對懸浮生長細(xì)胞，取25-50μl細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
2. 熒光顯微鏡下，用藍(lán)光激發(fā)，觀察和拍攝細(xì)胞綠色發(fā)射圖像，缺氧損傷細(xì)胞綠色熒光強(qiáng)度增加。
流式細(xì)胞儀分析：
對貼壁生長細(xì)胞，用胰酶消化制備成單細(xì)胞懸液；對懸浮生長細(xì)胞，直接收集細(xì)胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重懸細(xì)胞（5~10萬）。
采用488 nm波長激發(fā)，測定500-526 nm的發(fā)射。
缺氧細(xì)胞有較強(qiáng)的綠色熒光強(qiáng)度增加。
