批準(zhǔn)文號： 獸藥生字 154028082
通用名稱：雞新城疫血凝抑制試驗抗原、陽性血清與陰性血清
商品名稱：無
英文名稱： Newcastle Disease Hemagglutination Inhibition Test Antigen ，Positive Sera and Negative Sera
漢語拼音：Ji Xinchengyi Xueningyizhishiyan Kangyuan，Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
抗原含有滅活的雞新城疫病毒，血凝效價應(yīng)≥1:512 。陽性血清為雞新城疫高免的 SPF 雞 血清， HI 效價應(yīng)≥1:512。陰性血清為 SPF 雞血清。
抗原為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解；陽性血清和陰性 血清均為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。
用于血凝抑制試驗檢測雞新城疫抗體。
1 血凝(HA)試驗操作方法
1.1 在 V 型微量反應(yīng)板中，每孔加 0.025ml PBS 溶液。
1.2 第 1 孔加入 0.025ml 抗原，依次作 0.025ml 的對倍稀釋至第 11 孔；為精確計算血凝 單位，病毒懸液開始需作一系列密集稀釋，如 1/3 、1/4 、1/5 、1/6 等。
1.3 每孔加 0.025ml PBS 溶液。
1.4 每孔加 0.025ml 1% (V/V) 雞紅細(xì)胞懸液。
1.5 將反應(yīng)板在振蕩器上振蕩 1~2 分鐘或輕叩反應(yīng)板混合反應(yīng)物，室溫(20~25℃)靜置 15~30 分鐘或2~8℃ 45~60 分鐘，當(dāng)對照孔的紅細(xì)胞顯著呈紐扣狀時判定結(jié)果。
1.6 結(jié)果判定 將反應(yīng)板傾斜 60°，觀察紅細(xì)胞有無呈淚珠樣流淌，完全無淚珠樣流淌(100% 凝集) 的最高稀釋倍數(shù)為血凝效價。表示 1 個 HA 單位(HAU)，再根據(jù)開始的稀釋倍數(shù)精確 計算血凝效價。
2 血凝抑制(HI)試驗操作方法
2. 1 根據(jù) HA 測定的效價，計算配制 4 個血凝單位(4HAU)抗原。
2.2 反應(yīng)板中每孔加入 0.025ml PBS。
2.3 第 1 孔中加入 0.025ml 血清。
2.4 在反應(yīng)板上將血清做橫向 0.025ml 的對倍稀釋，至第 10 孔。
2.5 在第 1 孔至第 11 孔中，每孔加入 0.025ml 的 4HAU 抗原，室溫下(20~25℃)靜置 30 分鐘或 2~8℃ 45~60 分鐘。
2.6 每孔加入 0.025ml 1% (V/V) 的雞紅細(xì)胞懸液，輕晃混勻后，室溫(20~25℃)靜置 20~40 分鐘或 2~8℃ 45~60 分鐘，當(dāng)對照孔紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時判定結(jié)果。
2.7 結(jié)果判定 以完全抑制 4HAU 抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的 HI 效價。當(dāng)陽性 血清的 HI 效價與已知效價誤差不超過 1 個滴度， 陰性血清效價不高于 1:4 時，試驗方可成立。 被檢樣品 HI 效價≤1:4 判為陰性；等于 1:8 判為可疑(可疑樣品應(yīng)重檢，重檢效價≥1:8 判為陽性， ＜1:8 判為陰性)；≥ 1:16 判為陽性。
(1) HA 和 HI 試驗影響因素甚多， 應(yīng)嚴(yán)格控制試驗條件， 準(zhǔn)確控制紅細(xì)胞懸液和抗原工 作濃度，同時應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和作用時間。
(2) 用 pH 值 7.0~7.2 的 PBS 作稀釋液。
(3) 抗原和陰、陽性血清若有污染，應(yīng)廢棄。
(4) 使用時應(yīng)先測抗原的血凝價，根據(jù)所測結(jié)果，配制4 個血凝單位的抗原，配好后的抗原 應(yīng)在2 小時內(nèi)用完。
(5)抗原開封后 2~8℃保存， 應(yīng)不超過 3 個月。切忌反復(fù)凍融。
抗原、陽性血清和陰性血清： (1) 1ml/瓶 (2) 2ml/瓶
2~8℃保存，抗原、陽性血清和陰性血清有效期均為 24 個月。
