| 產(chǎn)品及特點(diǎn) | 本產(chǎn)品是基于蛋白質(zhì)鹽析和透析原理開(kāi)發(fā)的非變性蛋白質(zhì)濃縮產(chǎn)品。其原理是將大量具有很強(qiáng)水化能力的硫酸銨加到蛋白質(zhì)溶液中，奪取蛋白質(zhì)分子的水化層（尤其是蛋白質(zhì)表面非極性區(qū)的水化層），使之“失水”，于是蛋白質(zhì)分子間的非極性基團(tuán)將互相結(jié)合，使蛋白質(zhì)形成沉淀，離心分離沉淀后，再用透析方法將蛋白質(zhì)中的鹽除去，即得濃縮的蛋白質(zhì)。本產(chǎn)品的特點(diǎn)如下： 1. 適合于濃縮各種蛋白質(zhì)粗提液，一次可以處理 50 mL 蛋白質(zhì)溶液。 2. 非變性法，不會(huì)破壞蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和活性，尤其是適用于對(duì)變性敏感的酶溶液。 3. 得到的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，適合于長(zhǎng)期保存。 4. 可以在透析是進(jìn)行緩沖液的調(diào)換。 5. 一站式，帶有鹽析和透析所需的物品。 | ||||
| 規(guī)格及成分 |
| 成 份 | 編 號(hào) | 10 次包裝 |
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| 溶液A | 81029A | 50 mL×10 |
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| 無(wú)菌水 |
| 50 mL |
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| EDTA 溶液(0.5M) |
| 0.5 mL |
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| 使用手冊(cè) | 81029sc | 1 份 |
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| 運(yùn)輸及保存 | 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。 | ||||
| 自備試劑 | 透析液。 | ||||
| 使用方法 | 注意：除對(duì)溫度敏感的蛋白質(zhì)樣品需在 4℃環(huán)境下（如冷室）操作外，一般可在室溫中操作，操作者整個(gè)操作須戴好手套。 一：鹽析沉淀 1、 測(cè)量待濃縮蛋白質(zhì)樣品的體積，并將其轉(zhuǎn)移到容積至少是樣品體積兩到三倍的無(wú)菌燒杯或玻璃三角瓶中。注意：需要處理的蛋白質(zhì)樣品最好溶解在 pH 為中性的緩沖液中（如 50 mM 的 Tris-HCl），濃度最好在 1mg/mL 以上。 2、 將一個(gè)無(wú)菌的磁力攪拌子放入三角瓶中，再將三角瓶放置在磁力攪拌器上，打開(kāi)開(kāi)關(guān)后緩慢攪拌。注意：攪拌過(guò)程中不能產(chǎn)生泡沫。 3、 如果待濃縮蛋白容易被金屬離子失活或抑制，則最好加入 EDTA 溶液， 使其終濃度為 10 mM，否則此步可省略。 | ||||
4、 根據(jù)所需硫酸銨的飽和度計(jì)算需要加入的溶液 A 的體積，溶液 A 的硫酸銨飽和度是 100%。一般 50%的硫酸銨飽和度就可以沉淀絕大部分蛋白，超過(guò)此飽和度溶液比重很大，難以通過(guò)離心收集蛋白質(zhì)沉淀。
7、 將溶液輕移到旋蓋塑料離心管或離心瓶中，在平衡條件下 15000×g 4℃離心 15 分鐘。注意：溶液比重很大，一定要重量上平衡而非體積平衡。
8、 小心棄上清，得到蛋白質(zhì)沉淀。此沉淀可以在 4℃放置數(shù)月。
9、 將盡可能少的無(wú)菌水或其他緩沖液加入蛋白質(zhì)沉淀中使之溶解，所加體積一般是沉淀物體積的 1-2 倍。如果沉淀溶解后非常粘稠，可以適當(dāng)補(bǔ)加無(wú)菌水使其變得不粘稠。此沉淀可以在 4℃放置幾天。
10、如果溶液中有不溶物（主要是變性的蛋白質(zhì)），可以 15000×g 4℃離心
11、上清液可以用于 SDS-PAGE 電泳檢測(cè)或 UV 法蛋白質(zhì)濃度測(cè)定。
12、如果后續(xù)純化方法是疏水層析或排阻層析，則不需要將溶液中殘留的鹽去掉，可以直接使用。如果后續(xù)純化是離子交換層析，則需要將溶液中殘留的鹽去掉，一般采用透析法，具體操作見(jiàn)附一。
附一：透析脫鹽
1、 將蛋白溶液轉(zhuǎn)移到一端已經(jīng)封口的透析袋內(nèi)，預(yù)留一些液體膨脹的空間，然后將另一端封口。注意：用戶(hù)需要預(yù)處理透析袋，預(yù)處理的方法是將透析袋在含 2%（W/V）碳酸氫鈉和 1 mM EDTA 的溶液中煮沸 10 分鐘，用蒸餾水徹底清洗透析袋，然后放在 1 mM EDTA 的溶液中煮沸 10分鐘并浸沒(méi)在此溶液中冷卻，最后放 4℃保存待用。取用時(shí)必須要戴手套。
2、 將透析袋放置在裝有透析液的容器中，透析液的體積必須是蛋白質(zhì)溶液的 20-100 倍，溶液最好處于攪拌狀態(tài)。用戶(hù)可以用適合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的任何緩沖液作為透析液。每次透析 3-4 小時(shí)，共透析 2-3 次�？梢杂米詡�的萘氏試劑檢測(cè)透析袋外面溶液是否還有殘留的銨離子來(lái)檢測(cè)透析是否完成。
3、 將透析后的溶液全部轉(zhuǎn)移到離心管中，15000×g 4℃離心 15 分鐘，上清液即為濃縮后的蛋白溶液�？梢苑�-80℃冰箱保存或立即用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
4、 如果需要快速測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度，可取少許樣品作適當(dāng)倍數(shù)稀釋后，用紫外分光光計(jì)測(cè) 280nm 和 260nm 的光吸收，再計(jì)算其濃度，計(jì)算公式為：蛋白濃度(mg/mL)＝(1.45×OD280-0.74×OD260)×樣品稀釋度。
附二：多克隆抗體的濃縮
1、 將待處理的血清樣品在 4℃或室溫 20000×g 離心 30 分鐘，收集上清。
2、 取上清 20mL 與等體積的自備生理鹽水混合后，于攪拌下緩慢滴加 40 mL 溶液 A。注意：加等量生理鹽水的目的是將蛋白質(zhì)含量降低到 2.5-3.0%，否則其他蛋白質(zhì)會(huì)跟抗體一起共沉淀。
3、 冰上放置 30 分鐘以上或過(guò)夜，使蛋白質(zhì)充分沉淀。
4、 將溶液轉(zhuǎn)移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心 10 分鐘，棄上清。
5、 用 12 mL 自備生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀。
6、 于攪拌下緩慢滴加 8 mL 溶液A，冰上放置 1 小時(shí)使蛋白充分沉淀。
7、 將溶液轉(zhuǎn)移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心 10 分鐘，棄上清。
8、 用 13.3 mL 生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀。
9、 于攪拌下緩慢滴加 6.6 mL 溶液 A，冰上放置 1 小時(shí)使蛋白充分沉淀。
10、將溶液輕移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心 10 分鐘，棄上清。
11、用少許生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀，并轉(zhuǎn)移到透析袋中。
12、用大于 20-100 倍體積的PBS 于 4℃對(duì)蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行透析，更換透析液數(shù)次，然后讓蛋白質(zhì)溶液置-80℃保存或用其他方法進(jìn)一步純化。
