四環(huán)素類檢測試劑盒使用說明書
（酶聯(lián)免疫法）
1 原理及用途
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法檢測組織、蜂蜜、雞蛋、
尿樣等樣本中的四環(huán)素類藥物（
Tetracyclines，TCs），試劑
盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品
及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本
中的四環(huán)素類藥物和酶標板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗四環(huán)素
類藥物抗體，加入酶標記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光度
值與其所含四環(huán)素類藥物含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可
得出樣本中四環(huán)素類藥物的殘留量。
2 技術(shù)指標
2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：37℃，30min～30min～15min
2.3 檢測下限：
組織、肝臟、雞蛋………………12ppb
蜂蜜………………………………12ppb
尿樣………………………………3ppb
牛奶………………………………12ppb
奶粉………………………………24ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
四環(huán)素………………………………100%
金霉素………………………………340%
土霉素………………………………51%
強力霉素……………………………8.5%
2.5 樣本回收率：
組織、肝臟、雞蛋…………75±20%
蜂蜜…………………………80±20%
尿樣…………………………80±20%
牛奶、奶粉…………………75±20%
3 試劑盒組成
酶標板……………………………96 孔
高濃度標準品溶液 1 瓶：（1ml/瓶）1.0ppm（高標準液有
揮發(fā)性，需注意密封）
標準品溶液 0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、
24.3ppb（均為空瓶子，現(xiàn)配現(xiàn)用）。
酶標記物（紅蓋）…………………11ml
抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml
底物液 A（白蓋）……………………6ml
底物液 B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
5×復(fù)溶液（黃蓋） …………………50ml
說明書…………………………………1 份
蓋板膜…………………………………1 張
自封袋…………………………………1 個
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩
器、離心機、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
4.2 微量移液器：單道 20µl-200µl，100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 試劑：濃鹽酸、無水甲醇
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實
驗結(jié)果。
5.2 配液：
配液 1：復(fù)溶液
將 5×復(fù)溶液用去離子水 5 倍稀釋（
1 份 5×復(fù)溶液加 4 份
去離子水），用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在 4℃環(huán)境可保存一個月。
配液 2：工作洗滌液
將濃縮洗滌液 20 倍稀釋(1 份洗滌液加 19 份去離子水)。
配液 3：樣本提取液
取 4.3mL 濃鹽酸加去離子水混勻，定容至 50mL，再加入
450ml 無水甲醇。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 組織、肝臟、雞蛋樣本處理方法
1）準確稱取 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于離心管中，加入 2ml 樣
本提取液（配液 3），劇烈振蕩 2min，使樣本徹底分散，充分
與有機相接觸，室溫 4000 轉(zhuǎn)/分以上，離心 5min；
2）取出 50ul 上層液體（樣本脂肪多會有白色漂浮物，不要取
到）,加入 950ul 復(fù)溶液混勻；
3）取 50 µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：40
檢測下限：12ppb
5.3.2 蜂蜜樣本處理方法
1）準確稱取 1±0.05g 蜂蜜樣本于離心管中，加入 1ml 樣本提
取液（配液 3），振蕩混勻 2min，使蜂蜜充分溶解；
2）取出 50ul 混合液,加入 950ul 復(fù)溶液混勻；
3）取 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：40
檢測下限：12ppb
5.3.3 尿樣本的處理方法
1）用復(fù)溶液將尿樣 10 倍稀釋（如果尿樣渾濁一定要過濾或離
心 10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本
應(yīng)冷凍保存。
2）取 50µl 稀釋的尿樣用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：10
檢測下限：3ppb
5.3.4 牛奶樣本處理方法
1）準確吸取 1ml 牛奶于離心管中， 加 2ml 樣本提取液（配液
3），振蕩 2min，室溫 4000 轉(zhuǎn)/分以上，離心 5min；
2）取 50ul 上層液，加入 950ul 復(fù)溶液，混勻；
3）取 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：40
檢測下限：12ppb
5.3.5 奶粉樣本處理方法
1）準確稱取 1±0.05g 奶粉于離心管中，加入 4ml 樣本提取液
（配液 3），振蕩 2min，室溫 4000 轉(zhuǎn)/分以上，離心 5min；
2）取 50ul 上層液，加入 950ul 復(fù)溶液，混勻；
3）取 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：80
檢測下限：24ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟產(chǎn)品縮寫：TCs
貨號：E102001
版本：2022.1
2
將所需試劑從 4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡 30min
以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，
每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框
架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。
實驗開始前需配制標準品應(yīng)用液；低濃度的標準品不穩(wěn)
定，需現(xiàn)配現(xiàn)用。
在 0ppb 的瓶中加復(fù)溶液 3ml，0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、
8.1ppb 的瓶中分別加復(fù)溶液 2ml，24.3ppb 的瓶中加復(fù)溶液
2.93ml。
標準液 6：取 1.0ppm 高濃度標準品溶液 73ul 加入裝有
2.93ml 復(fù)溶液 24.3ppb 的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 24.3ppb。
標準液 5：取 1ml 標準液 6 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 8.1ppb
的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 8.1ppb。
標準液 4：取 1ml 標準液 5 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 2.7ppb
的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 2.7ppb。
標準液 3：取 1ml 標準液 4 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 0.9ppb
的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 0.9ppb。
標準液 2：取 1ml 標準液 3 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 0.3ppb
的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 0.3ppb。
標準液 1：直接使用復(fù)溶液，濃度即為 0ppb。
6.1 編
號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本
和標準品做 2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標準品應(yīng)用液或樣本 50µl/孔到各自的微孔
中，然后加抗體工作液 50µl/孔，輕輕振蕩 5 秒混勻，37℃避
光反應(yīng) 30 分鐘。
6.3 洗
滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加 350ul
工作洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù)洗滌 5 次，最后一次拍
干。（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭
刺破）。
6.4 加酶反應(yīng)：加酶標記物 100µl/孔，37℃避光反應(yīng) 30 分鐘。
6.5 洗
滌：同上
6.6 顯
色：加底物液 A 50µl/孔，再加底物液 B 50µl/孔，
輕輕振蕩 5 秒混勻，37℃避光顯色 15 分鐘（若藍色過淺，可
適當延長反應(yīng)時間）。
6.7 終
止：加終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值：用酶標儀于 450nm 處測定每孔吸光度值（建議
用雙波長 450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后 10 分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸
光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準液（
0ppb）的吸光度
值，再乘以 100%，即
百分吸光度值（%）＝ A ×100% A0
A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb 標準溶液的平均吸光度值
7.2 標準曲線的繪制與計算
以標準液百分吸光率為縱坐標，對應(yīng)的標準液濃度（
ppb）
的對數(shù)為橫坐標，繪制標準液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分
吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃
度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的
準確、快速分析。（歡迎來電索�。�
8 注意事項
8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（
25℃）會導(dǎo)致
所有標準的 OD 值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲
線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行
下一步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很
大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試
劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0 標準的吸光
度值小于 0.5 個單位（
A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，避免冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
我要詢價
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