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核酸酶ELISA試劑盒

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 產(chǎn)品簡介

本品采用雙抗夾心法檢測樣本中 Benzonase 含量。將 Benzonase 特異性抗體預(yù)包被在微孔板上,使用時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本分別加入到已 包被特異性抗體的反應(yīng)孔內(nèi),樣本中的 Benzonase 會(huì)與微孔板中的抗體結(jié)合,孵育后洗滌以去除微孔板內(nèi)未結(jié)合的物質(zhì),加入 Benzonase 檢測 抗 體(HRP 標(biāo)記) ,形成抗體 - 抗原 -HRP 標(biāo)記抗體的復(fù)合物,加入 TMB 進(jìn)行孵育顯色,顯色程度與 Benzonase 濃度成比例關(guān)系,通過測定 Benzonase 標(biāo)準(zhǔn)品的顯色來判斷樣本中 Benzonase 殘留程度。
檢測范圍:  0.094~6 ng/ml
定  量  限:  0.094 ng/ml
檢  測  限:  0.019 ng/ml
產(chǎn)品組成:

組分

組分 ( 中文 )

規(guī)格

Benzonase Standard

Benzonase 標(biāo)準(zhǔn)品

1000 ng/ml, 0.8 ml, 1 Vial

Benzonase Detection Antibody (HRP labeled)

Benzaonase 檢測抗體(HRP 標(biāo)記)

12 ml, 1 Vial

TMB Substrate

TMB 底物

12 ml, 1 Vial

Stop Solution

終止液

12 ml, 1 Vial

Sample Diluent

樣品稀釋液

50 ml, 1 Vial

Wash Buffer (20×)

漂洗液

50 ml, 1 Vial

Microtiter Plate (Coated)

預(yù)包被酶標(biāo)板

96  , 1 Plate


所需器材:酶標(biāo)儀、微孔板恒溫振蕩器、渦旋振蕩器、移液器、封板膜等。

試劑配制
1. 平衡:將所需試劑轉(zhuǎn)移到室溫(25 ± 3℃)  平衡至少 30 min;確定測定運(yùn)行的孔數(shù),  取出所需的酶標(biāo)條,   其它放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中, 然后重新密封并置于 2~8℃保存。
2. 1 × 漂洗液配制:根據(jù)本次試驗(yàn)所需洗板液體積,量取漂洗液(20× )適量,用去離子水按照 1:20 體積比稀釋,混勻后備用。 
3. 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制(示例):

 

序號(hào)

 

標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ng/ml

 

標(biāo)準(zhǔn)液體積(μl

 

稀釋液體積(μl

 

總體積(μl

 

終濃度(ng/ml

 

剩余體積(μl

StA

1000

20

180

200

100

170

St8

100

30

470

500

6

250

St7

6.0

250

250

500

3.0

250

St6

3.0

250

250

500

1.5

250

St5

1.5

250

250

500

0.75

250

St4

0.75

250

250

500

0.375

250

St3

0.375

250

250

500

0.188

250

St2

0.188

250

250

500

0.094

250

St1(Blank)

/

/

300

300

0

300


實(shí)驗(yàn)流程
1. 混勻:臨用前將平衡至室溫的試劑輕輕混勻。
2. 加樣:分別加入 100  μl 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 (St1~St8) 或待測樣品至相 應(yīng)孔中,加蓋或封板膜封板后在室溫(25 ± 3 ℃)條件下 400~500 rpm 孵育 1 h。
3. 洗滌:甩掉孔內(nèi)液體,每孔加入至少 1× 漂洗液 350  μl  (可用  多通道移液器或者洗瓶)  ,再甩去孔內(nèi)液體后于無塵紙上輕拍至拍干。 重 復(fù) 3 次。(注意: 在 加入 Benzonase 檢 測抗 體溶 液 前勿使 板孔 長  時(shí)間過分干燥。洗滌不當(dāng)可能使復(fù)孔間 CV 值偏大, 信號(hào)偏高或偏低) 。
4. 標(biāo)記:每孔加入 Benzonase 檢測抗體(HRP 標(biāo)記)溶液 100 μl  ,加蓋或封板膜封板后在室溫(25 ± 3℃ )條件下 400~500  rpm 孵育 30 min。
5. 洗滌:甩掉孔內(nèi)液體,每孔加入至少 1× 漂洗液 350  μl  (可用  多通道移液器或者洗瓶)  ,再甩去孔內(nèi)液體后于無塵紙上輕拍至拍干。 重復(fù) 3 次。(注意:在加入 TMB 底物前勿使板孔長時(shí)間過分干燥)
6. 顯色:每孔加入 TMB 底物 100  μl  ,室溫(25  ± 3℃)避光顯 色 20 min。
7. 終止:每孔加入終止液 100 μl,輕輕敲擊孔板使混勻, 終止反應(yīng)。 8. 測定:加入終止液后 10 min 內(nèi),在 450 nm 波長處讀取吸光值。

結(jié)果計(jì)算
本品建議采用濃度取 10 為底的對(duì)數(shù)后采用四參數(shù) Logistic 模型擬 合方式進(jìn)行擬合計(jì)算。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml

吸光值

測定 1

測定 2

均值

6

1.770

1.778

1.774

3.0

1.088

1.153

1.121

1.5

0.704

0.658

0.681

0.75

0.386

0.417

0.401

0.375

0.241

0.241

0.241

0.188

0.154

0.169

0.161

0.094

0.116

0.122

0.119

0

0.082

0.082

0.082


                       
   典型標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜(四參數(shù) Logistic 模型)
產(chǎn)品性能
檢測限:0.019 ng/ml。將 20 個(gè)空白對(duì)照的平均吸光值加上 2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差 后代入標(biāo)曲確定。
定量限: 0.094 ng/ml。確保變異系數(shù) (n=6) 在 20% 以內(nèi)的最低濃度。
線性:測定不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,并繪制曲線,  R2≥0.98。
重復(fù)性:三個(gè)已知濃度樣品重復(fù)測試 20 次,評(píng)估重復(fù)性。
中間精密度:三個(gè)已知濃度樣品不同時(shí)間不同人測試 4 次,評(píng)估中間精 密度。

名稱

重復(fù)性(n=20

中間精密度(n=4

低濃度

中間濃度

高濃度

低濃度

中間濃度

高濃度

均值(ng/ml

0.28

0.92

4.55

0.28

0.92

4.49

SD

0.035

0.075

0.371

0.037

0.078

0.343

CV%

12.4

8.2

8.1

13.1

8.6

7.6


注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于臨床診斷或治療。
2. 試劑應(yīng)該按照標(biāo)簽標(biāo)明的條件進(jìn)行儲(chǔ)存,試劑和待測樣本使用 前應(yīng)平衡至室溫。
3. 預(yù)包被酶標(biāo)板使用前,應(yīng)平衡至室溫后再打開包裝袋取用,剩 余的板條應(yīng)立即放回包裝中重新密封, 置于 2~8℃保存。剩余試劑也 應(yīng)重新密封后按標(biāo)簽標(biāo)明的條件進(jìn)行儲(chǔ)存。
4. Benzonase 標(biāo)準(zhǔn)品、 Benzonase 檢測抗體(HRP 標(biāo)記)溶液 應(yīng)混勻后再使用。
5. 洗滌過程中板孔殘留的液體應(yīng)在潔凈的無塵紙上拍干,拍干后 的板孔不宜長時(shí)間過分干燥,否則不恰當(dāng)?shù)南礈爝^程會(huì)造成復(fù)孔的 CV 值偏高或者空白(0 ng/ml)吸光值偏高,影響結(jié)果準(zhǔn)確性。
6. TMB 底物應(yīng)該是無色透明液體,如果顯示淡藍(lán)色,證明該溶液 已經(jīng)被污染,不適合進(jìn)行后續(xù)分析使用。
7. 樣本處在極端 pH 值(<5.0 或 >8.5) ,或者含高鹽、高聚糖、 高尿素、高有機(jī)溶劑和高的去污劑的溶液中,均有可能導(dǎo)致較低回收 率。
8. 由于生物樣本基質(zhì)的復(fù)雜性,建議每次試驗(yàn)加陽性質(zhì)控試驗(yàn)樣 品,確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性,并采用復(fù)孔進(jìn)行試驗(yàn)。
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