| 質(zhì)粒宿主： | 枯草桿菌 |
|---|---|
| 質(zhì)粒用途： | 蛋白表達(dá) |
| 片段類型： | ORF |
| 片段物種： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 篩選標(biāo)記： | Ery,Spe |
| 熒光標(biāo)記： | |
| 啟動(dòng)子: | |
| 復(fù)制子: | |
| 拷貝數(shù): | |
| 感受態(tài): | Stbl3 |
| 溫度: | 37度 |
一、擴(kuò)增流程
收到產(chǎn)品后，請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒菌株的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
（一）干粉質(zhì)粒
產(chǎn)品規(guī)格：0.5μg質(zhì)粒干粉，保證能轉(zhuǎn)化出來，不保證具體含量，請務(wù)必先轉(zhuǎn)化進(jìn)感受態(tài)，再挑單菌落提取后再使用。
保質(zhì)期限：90天，請盡快轉(zhuǎn)化。
保存溫度：一般在-20°C，置于-80°C保存時(shí)間更長。
運(yùn)輸方式：常溫運(yùn)輸，1周內(nèi)。
注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)化前請準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒相應(yīng)的抗性、抗性濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
使用說明：
1、收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl無菌水溶解質(zhì)粒，室溫放置1min；
2、從-80°C冰箱中取出相應(yīng)的感受態(tài)，置于冰盒上解凍，并做好標(biāo)記；
3、取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中，冰浴30min;
4、42°C熱激90s，再冰浴2min;
5、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min;
6、6000rpm離心5min，僅留100μl上清混勻菌體沉淀；
7、混勻后的菌液加至對(duì)應(yīng)抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；
8、將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置培養(yǎng)12h～16h;
9、挑取單克隆菌落至對(duì)應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)12h~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒。
注意：如果第二天轉(zhuǎn)化平板長的過多，請將質(zhì)粒按比例稀釋后再轉(zhuǎn)化。
（二）甘油菌種（冰袋運(yùn)輸，存于-80℃，保質(zhì)期90天，請務(wù)必劃線挑單克隆培養(yǎng)）
產(chǎn)品規(guī)格：甘油菌種。
保質(zhì)期限：90天，請盡快劃線培養(yǎng)。
保存溫度：-80℃。
運(yùn)輸方式：冰袋運(yùn)輸，1周內(nèi)。
注意事項(xiàng)：培養(yǎng)前請準(zhǔn)確查找該菌種的抗性、抗性濃度和培養(yǎng)溫度。
使用說明：
1、收到甘油菌種后請甩動(dòng)保存管，讓菌液不要吸附在管壁上；
2、用接種環(huán)在固體平板上四區(qū)劃線，如有抗性就加對(duì)應(yīng)抗性；
3、恒溫培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)12~16h；
4、挑取單菌落接種于液體培養(yǎng)基中，如有抗性就加對(duì)應(yīng)抗性；
5、搖床震蕩培養(yǎng)12~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要保存甘油菌，酵母加30% 甘油，其它一般加15%甘油。
注意：務(wù)必要四區(qū)劃線挑單菌落培養(yǎng)。
（三）穿刺菌種（冰袋運(yùn)輸，存于4℃，保質(zhì)期7天）
穿刺接種，液體培養(yǎng)后四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng)。
4、菌落平板（冰袋運(yùn)輸，存于4℃，保質(zhì)期7天）
直接挑取單菌落至液體培養(yǎng)基中。
5、液體質(zhì)粒（冰袋運(yùn)輸，存于-20℃，保質(zhì)期90天）（強(qiáng)烈推薦委托我們大提）
單獨(dú)提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
6、濾紙質(zhì)粒（常溫運(yùn)輸，存于-20度，保質(zhì)期90天，請務(wù)必先轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒后使用）
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入EP管中，加100ul無菌水將濾紙浸濕并浸泡5min，吸取5ul質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，離心全涂。
7、常用抗生素推薦濃度：
二、轉(zhuǎn)化圖片
