產(chǎn)品簡介：

• 活死細(xì)菌染色試劑盒（LIVE/DEAD Bacterial Viability and Counting Kit, for flow cytometry）可以通過流式細(xì)胞儀有效的區(qū)分活、死細(xì)菌并實(shí)現(xiàn)定量檢測；而且對各類細(xì)菌的混合 物也可以實(shí)現(xiàn)定量分析檢測。該試劑盒采用兩種核酸染料來進(jìn)行細(xì)菌活力測定：綠色熒光染料meilungreen（自主研發(fā)，功能等同于SYTO 9）以及紅色熒光染料PI（碘化丙啶），并通過標(biāo)準(zhǔn)微球精準(zhǔn)測量樣品體積。用適當(dāng)比例的meilungreen與PI混合物染色時(shí)，細(xì)胞膜完好的細(xì)菌發(fā)出明亮的綠色熒光，而細(xì)胞膜受損的細(xì)菌則表現(xiàn)出綠色熒光明顯減弱，同時(shí)發(fā)出較強(qiáng)的紅色熒光。細(xì)胞類型和革蘭氏特征會影響死細(xì)菌產(chǎn)生紅色熒光的強(qiáng)度。meilungreen與PI染料在大部分流式細(xì)胞儀中都是由488nm激光器實(shí)現(xiàn)有效激發(fā)的，各自的核酸復(fù)合物熒光信號可分別在綠色通道和紅色通道中 檢測到，并且?guī)缀鯖]有背景熒光。
• 標(biāo)準(zhǔn)微球懸浮液作為樣品體積的參考標(biāo)準(zhǔn)，尺寸和熒光經(jīng)過仔細(xì)篩選，以確保微球在流式細(xì)胞檢測中熒光–側(cè)向散射圖中可以明顯的區(qū)別于被染色的細(xì)菌。用meilungreen和PI對細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行簡單染色，在流式細(xì)胞儀上分析樣本前加入固定數(shù)量的微球�；罹�和死菌以及微球在熒光–側(cè)向散射圖中很容易區(qū)分，然后通過細(xì)胞圖中細(xì)菌事件數(shù)與微球事件數(shù)的比值來計(jì)算死菌和活菌的濃 度（下圖1）。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)展示

1. 革蘭氏陰性菌（大腸桿菌為例）活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果對比

圖1：大腸桿菌活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果。大腸桿菌的活菌（未處理）、死菌（70%乙醇處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進(jìn)口品牌試劑盒進(jìn)行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細(xì)菌群與標(biāo)準(zhǔn)微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細(xì)菌群的分布。活、死菌的濃度計(jì)算可以通過綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實(shí)際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進(jìn)行計(jì)算�；�、死菌群的分布位置會因細(xì)菌種類和參數(shù)設(shè)置而存在差別，一些點(diǎn)會分布于劃定區(qū)域以外，也應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑u估。結(jié)果顯示活死細(xì)菌染色試劑盒檢測效果媲美進(jìn)口品牌。

2. 革蘭氏陽性菌（乳酸桿菌為例）活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果對比

圖2：乳酸桿菌活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果。乳酸桿菌的活菌（未處理）、死菌（電穿孔處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進(jìn)口品牌試劑盒進(jìn)行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細(xì)菌群與標(biāo)準(zhǔn)微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細(xì)菌群的分布。活、死菌的濃度計(jì)算可以通過綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實(shí)際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進(jìn)行計(jì)算�；�、死菌群的分布位置會因細(xì)菌種類和參數(shù)設(shè)置而存在差別，一些點(diǎn)會分布于劃定區(qū)域以外，也應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑u估。結(jié)果顯示活死細(xì)菌染色試劑盒檢測效果媲美進(jìn)口品牌。

操作簡易流程：

1. 準(zhǔn)備菌懸液
2. 細(xì)菌染色
3. 制備單染管進(jìn)行設(shè)備調(diào)節(jié)
4. 流式細(xì)胞儀檢測染色后的細(xì)菌
5. 計(jì)算：菌濃度=(菌群分布區(qū)事件數(shù)×稀釋倍數(shù))/(微球分布區(qū)事件數(shù)×5×106)/ mL

適用菌種范圍：

本試劑盒適用菌種廣泛，主要包括：蠟樣芽胞桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、黃體微球菌、草分枝桿菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、沙雷菌、宋內(nèi)志賀菌、金黃色葡萄球菌和釀膿鏈球菌等。以上菌種通過該試劑盒檢測的計(jì)數(shù)結(jié)果均能夠與標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)結(jié)果表現(xiàn)出良好的相關(guān)性。

保存條件：

染料和標(biāo)準(zhǔn)微球懸液都需4℃避光保存。

注意事項(xiàng)：

1、核酸染料管，使用前需恢復(fù)至室溫，并經(jīng)過短暫離心后再開啟。
2、不可冷凍標(biāo)準(zhǔn)微球。
3、核酸染料有毒，須戴手套操作，做好安全防護(hù)。

我司所售出產(chǎn)品僅供于科研研究用途（非臨床科研研究）