彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker（1.2-45kD）
|
| 分離膠 | 濃縮膠 |
|
| 18％T, 5%C /5 ml | 5％T, 3.3%C/2 ml |
| 40% PAA（19:1） | 2.25 ml | / |
| 40% PAA (29:1) | / | 0.25 ml |
| 4×凝膠緩沖液 | 1.25 ml | 0.5 ml |
| 乙二醇（電泳級） | 1.5 ml | / |
| ddH2O | / | 1.25ml |
| 10％APS | 50 μl | 20 μl |
| TEMED | 5 μl | 2 μl |
II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留乙醇吸去。
1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA（29:1）和4×凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。
2．加入10%過硫酸銨和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
4．靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合
二. 電泳：
1. 取Marker樣品，充分混勻后備用。不要加熱處理。
2. 電泳前，將10×陽極緩沖液和10×陰極緩沖液用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液，內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過2×Tricine上樣緩沖液處理）加入點(diǎn)樣孔，參考下表進(jìn)行電泳，至每條帶都清晰可見時(shí)停止電泳。整個(gè)電泳過程大約需要2-3個(gè)小時(shí)。
表二 多肽電泳條件
| 恒電壓 | 150V |
| 起始電流 | 60-75mA/板膠 |
| 結(jié)束電流 | 15-25mA/板膠 |
| 電泳時(shí)間 | 2.5-3小時(shí) |
三. 染色
根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟，用配方6和7（表三）進(jìn)行染色和觀察。如果使用配方6進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性，請選擇購買本公司的FastBlue蛋白染色液（貨號：YS6202），該產(chǎn)品除具有染色快，無毒，靈敏性高等特點(diǎn)外，還能對小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規(guī)染色液的理想替代品。
