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Tuner(DE3)Chemically Competent Cell

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 Tuner(DE3):                                              100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個月) 

基因型

FomphsdSB(rBmB) gal dcm lacY1 (DE3)

Tuner(DE3)Chemically Competent Cell

產(chǎn)品說明

Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株,此突變導(dǎo)致IPTG以均一速度進(jìn)入體系中大腸桿菌的每個細(xì)胞,產(chǎn)生更加嚴(yán)格、均一的濃度依賴。此菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體 (如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區(qū)整合于Tuner的染色體上,所以稱為Tuner(DE3),可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)10cfu/μg DNA。

操作方法

1.Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì);蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

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