注 意： 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。
測定原理：
胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應后顯藍色；一定范圍內，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入25 mL試劑二充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入25 mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入30 mL蒸餾水充分溶解。
試劑六：液體5mL×1瓶，4℃保存。
標準品：液體1.26mL×1支，0.5 μ mol/mL酪氨酸標準溶液濃度4℃保存。
粗酶液提�。�
組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測定步驟：
1.分光光度計預熱30min，調節(jié)波長到580 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑三和試劑四置于37℃水浴預熱30min。
3. 標準管：取玻璃比色皿，加入100μL標準品，200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A標準管。
4. 空白管：取玻璃比色皿，加入100μL蒸餾水，200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A空白管。
5. 對照管：取EP管，加入500 μL蒸餾水，置于37℃水浴保溫10min；加入500μL試劑四，蓋緊后搖勻1min；加入100μL粗酶液，混勻后8000g 4℃離心10分鐘取上清；在玻璃比色皿中加入上清液100μL，再加入200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A對照管。
6. 測定管：取EP管，加入100μL粗酶液，500 μL試劑三，置于37℃水浴保溫10min；加入500μL試劑四，
蓋緊后搖勻1min；8000g 4℃離心10分鐘取上清；在玻璃比色皿中加入上清液100μL，再加入200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A測定管。
注意：空白管和標準管只需要測定一次。
計算公式：
(1) 按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T=5500×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr
C標準品：標準品濃度，0.5 μ mol/mL酪氨酸；稀釋倍數(shù)：（100+500+500）÷100=11；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定；V1：加入反應體系中粗酶液體積（mL），100μL=0.1 mL；T：催化反應時間（min），10min。
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/g鮮重）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T=5500×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷W
C標準品：標準品濃度，0.5 μ mol/mL酪氨酸；稀釋倍數(shù)：（100+500+500）÷100=11；W：組織質量（g）；V1：加入反應體系中粗酶液體積（mL），100μL= 0.1 mL；V2：粗酶液總體積（mL），1mL；T：催化反應時間（min），10min。
注意事項
試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑4℃可保存一周。
