所需儀器及試劑: 可調(diào) 340nm 波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃水浴鍋或恒溫箱, 蒸餾水,生理鹽水,蛋白測(cè)定試劑(組織或細(xì)胞樣本用, 本公司有售)。
葡萄糖(GLU)試劑盒(己糖激酶法)操作過(guò)程:
1、樣本處理:
①、血清(或肝素抗凝血漿):直接測(cè)定,如超過(guò)線性 范圍用生理鹽水稀釋后測(cè)定。
②、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清測(cè)定。
[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100 萬(wàn)個(gè)/mL 以上。
③、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積 (mL)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水(或 PBS),冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離 心 10 分鐘,取上清液待測(cè)。
④、細(xì)胞樣本: A、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出,1000 轉(zhuǎn)/ 分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;用 等滲緩沖液(推薦 0.1mol/L、pH7~7.4 磷酸鹽緩 沖液)清洗 1~2 次,同樣 1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;
B、細(xì)胞破碎:加入 0.2~0.3mL 的勻漿介質(zhì)(推薦 0.1mol/L、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水) 進(jìn)行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率 300W, 3~5 秒/次,間隔 30 秒,重復(fù) 3~5 次)或手動(dòng)勻漿, 制備好的勻漿液不離心直接測(cè)定。也可采用裂解 液裂解(推薦 TritonX-100,1~2%,裂解 30~40 分鐘),裂解好的液體不離心直接測(cè)定。
試劑盒組成
產(chǎn)品描述: 本試劑盒可用于不同樣本的葡萄糖含量測(cè)定,液體 樣本(參照血清操作和計(jì)算方法),固體樣本(參照組織、 細(xì)胞的操作及計(jì)算方法),
主要用于酶標(biāo)儀測(cè)定葡萄糖含 量,人血清樣本參考范圍為(3.89-6.4mmol/L)。
性能指標(biāo): 1、試劑空白管吸光度≤0.6(光徑 1cm)。
2、線性:2.2~15mmol/L 范圍內(nèi),r 2>0.995。
3、精密度:CV≤5%,批間相對(duì)極差≤8%。
4、穩(wěn)定性:原裝試劑盒在 2℃~8℃避光保存,
有效期 為 12 個(gè)月。
開(kāi)啟后 2℃~8℃避光保存,可穩(wěn) 定 1 個(gè)月;試劑不可冷凍。
葡萄糖(GLU)試劑盒(己糖激酶法)注意事項(xiàng):
1、本產(chǎn)品僅用于科研,不得用于臨床診斷,切勿服用。
2、樣品含量如超出檢測(cè)范圍上限時(shí),可用生理鹽水稀釋 樣本后進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
3、試劑與樣本量可按照全自動(dòng)生化分析儀的要求,按照 1:100 的比例增減。
參考文獻(xiàn): 1、《現(xiàn)代臨床生化檢驗(yàn)學(xué)》,張秀明、李建齋,2001,P84 2、《實(shí)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)》,朱忠勇,1992,P426