【產(chǎn)品名稱】
通用名：口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測試劑試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus NSP-3ABC （ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。
本試劑用于檢測牛、綿羊、山羊和豬的血清中口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體，可用于口蹄疫野毒感染篩查和輔助診斷。
【原 理】
本試劑盒由預(yù)包被口蹄疫病毒3ABC抗原的酶標(biāo)板、抗體工作液、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用競爭酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入待檢樣本和抗體工作液，經(jīng)溫育后洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有口蹄疫病毒3ABC抗原特異性抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體。
【試劑盒組成】
| 序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
| 1 | 酶標(biāo)記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
| 2 | 樣品稀釋液 | 50ml×1(黃蓋) | 100ml×1(透明) | 250ml×1(透明) |
| 3 | 10X濃縮洗滌液 | 50ml×1(白蓋) | 100ml×1(透明) | 250ml×1(透明) |
| 4 | 底物顯色液 | 10ml×1(黑蓋) | 10ml×2(棕蓋) | 25ml×2(黑蓋) |
| 5 | 終止液 | 6ml×1(黃蓋) | 12ml×1(黃蓋) | 30ml×1(黃蓋) |
| 6 | 陽性對(duì)照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
| 7 | 陰性對(duì)照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
| 8 | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
| 9 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
| 10 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
| 11 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.待檢血清樣本恢復(fù)室溫、混勻待用。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋成工作洗滌液(如9份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性、陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔先加入90μl樣品稀釋液，再加入10μl血清樣本。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水�。┍芄夥磻�(yīng)60分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔加入底物顯色液100μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)＞0.5，同時(shí)陽性對(duì)照(P)阻斷率>60%。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.PI（阻斷率）=（1- 陰性對(duì)照平均A值）×100%，
2.PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅用作定性篩查口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體，對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性的樣本需結(jié)合臨床及其他檢測數(shù)據(jù)綜合分析。
【口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測試劑試劑盒（酶聯(lián)免疫法）注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
