哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)增強(qiáng)質(zhì)粒pVAI RNA是一種通過(guò)表達(dá)Virus associated RNA I (VAI RNA)以抑制PKR被dsRNA激活，從而在哺乳動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或病毒感染時(shí)促進(jìn)目的蛋白翻譯和表達(dá)的輔助質(zhì)粒。pVAI RNA也可以用于在慢病毒包裝時(shí)，通過(guò)增強(qiáng)病毒外殼蛋白的表達(dá)，從而提高病毒的產(chǎn)量。pVAI RNA質(zhì)粒帶有氨芐青霉素(Ampicillin)抗性基因，可利用其氨芐青霉素抗性轉(zhuǎn)化大腸桿菌后篩選陽(yáng)性克隆。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)�；蚋腥静《颈磉_(dá)目的蛋白時(shí)，經(jīng)常遇到目的蛋白表達(dá)量偏低的情況。細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)�；蚋腥静《竞�，通常會(huì)轉(zhuǎn)錄生成大量的RNA，其中部分會(huì)形成雙鏈RNA (dsRNA)，dsRNA會(huì)激活蛋白激酶R (Protein kinase R, PKR，也稱作DAI、p68 kinase、dsI、PKds、P1/eIF2α protein kinase)。PKR是哺乳動(dòng)物細(xì)胞抗病毒防御系統(tǒng)的關(guān)鍵酶之一，被dsRNA激活的PKR可以磷酸化轉(zhuǎn)錄起始因子eIF-2α (Eukaryotic initiation factor 2α)，從而抑制mRNA的翻譯和蛋白的表達(dá)[1]。pVAI RNA與帶有目的基因的表達(dá)質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞中的RNA聚合酶III (RNA polymerase III)能夠轉(zhuǎn)錄pVAI RNA質(zhì)粒上的腺病毒編碼的病毒相關(guān)RNA (Virus associated RNA I, VAI RNA)，VAI RNA能夠與PKR結(jié)合并抑制其被dsRNA激活，從而增強(qiáng)目的蛋白的表達(dá)[2-3]。VAI RNA也被發(fā)現(xiàn)可以用于在慢病毒包裝時(shí)提高包裝產(chǎn)生的病毒滴度[4]。VAI RNA促進(jìn)蛋白翻譯和表達(dá)的工作原理如下圖所示。
圖1. pAVI RNA (哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)增強(qiáng)質(zhì)粒)工作原理圖。
pVAI RNA與表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞增強(qiáng)目的蛋白表達(dá)水平的效果取決于多種參數(shù)，包括細(xì)胞類型、轉(zhuǎn)染方法和pVAI RNA載體與表達(dá)質(zhì)粒的使用比例(建議1:10-1:1)等。這些參數(shù)的優(yōu)化對(duì)獲得比較理想的增強(qiáng)至關(guān)重要。
pVAI RNA質(zhì)粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Adenovirus type 2 genome | 1-1724 |
| Adenovirus VAI RNA gene | 780-939 |
| Adenovirus VAII RNA gene | 1036-1198 |
| lac operator | 1767-1783 |
| lac promoter | 1791-1821 |
| CAP binding site | 1836-1857 |
| ori | 2145-2733 |
| Ampicillin resistance gene | 2904-3764 |
| Ampicillin promoter | 3765-3869 |
哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)增強(qiáng)質(zhì)粒pVAI RNA質(zhì)粒(4392bp)的圖譜如下：
pVAI RNA質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
M13-F (4342-4359): 5'-TGTAAA ACGACGGCCAGT-3'
M13-R (1742-1759): 5'-CAGGAA ACAGCT ATGACC-3'
pVAI RNA的全序列信息:D3019 pVAI RNA-全長(zhǎng)序列.txt。請(qǐng)聯(lián)系客服發(fā)送。
包裝清單：
| 產(chǎn)品名稱 | 包裝 | |
| pVAI RNA (哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)增強(qiáng)質(zhì)粒) | 1µg | |
| pVAI RNA (哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)增強(qiáng)質(zhì)粒) | 100µg | |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
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