| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代，每2-3天換液一次 | 凍存條件 | 細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液 |
| 細(xì)胞描述 | 組織來(lái)源：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物羊膜組織 質(zhì)量檢測(cè)CD44免疫熒光染色為陽(yáng)性，CD45免疫熒光染色為陰性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等 羊膜是附著在絨毛膜板表面的半透明膜。羊膜光滑，無(wú)血管、神經(jīng)及淋巴，具有一定的彈性。人類羊膜正常厚0.05mm。其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和基質(zhì)層含有大量不同的膠原。 MSC易于分離擴(kuò)增，體外倍增能力旺盛，即使擴(kuò)增1億倍仍能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實(shí)用的組織修復(fù)種子細(xì)胞。 | ||
| 培養(yǎng)備注 | 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng) | ||
收貨處理：取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)
傳代密度：細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù)：可傳2-3代，建議收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)
傳代比例：首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿
傳代方法
1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4.待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
