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人原代肺泡巨噬細胞

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細胞背景:肺泡巨噬細胞由單核細胞分化而來,廣泛分布在肺間質內,在細支氣管以下的管道周圍和肺泡隔內較多。肺泡巨噬細胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活躍,有重要防御功能。吸入空氣中的塵粒、細菌等異物進入肺泡和肺間質,多被巨噬細胞吞噬清除,故細胞胞質內常見塵粒、細菌等物進入肺泡和肺間質,多被巨噬細胞吞噬清除,故細胞胞質內常見塵粒、次級溶酶體及吞噬體等。肺巨噬細胞還可吞噬衰老的紅細胞,在心力衰竭患者出現(xiàn)肺瘀血時,大量紅細胞從毛細血管溢出,被巨噬細胞吞噬。吞噬異物的巨噬細胞,有的從肺泡腔經呼吸道粘液流動和纖毛運動而被咳出,有的進入肺淋巴管隨淋巴進入肺淋巴結內。

收貨處理:取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)
傳代密度:細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù):可傳2-3代,建議收到細胞后盡快進行相關實驗
傳代比例:首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法
1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4.待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基
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