支原體檢測 | 猴脾臟NK細胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌 | 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng) |
細胞背景 | 鵝組織DC細胞是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞,它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原,未成熟DC具有較強的遷移能力,成熟DC能有效激活初始型T細胞,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)。 DC的來源有兩條途徑:①髓樣干細胞在GM-CSF的刺激下分化為DC,稱為髓樣DC,也稱DCl,與單核細胞和粒細胞有共同的前體細胞;包括朗格漢斯細胞,間皮(或真皮)DCs以及單核細胞衍生的DCs等,②來源于淋巴樣干細胞,稱為淋巴樣DC或漿細胞樣DC,即DC2,與T細胞和和臍帶血DC細胞有共同的前體細胞。樹突狀細胞(DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子,是功能強大的專職抗原遞呈細胞(APC)。DC自身具有免疫刺激能力,是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能激活未致敏的初始型T細胞的APC | ||
分離方法 | 通過密度梯度離心獲得 |
收貨處理:取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)
傳代密度:細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù):可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳,建議收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗
傳代比例:首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法
1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4.待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
重要提醒
1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2.在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3.傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。
到貨須知
1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否完全揮發(fā),細胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2.靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
3.由于運輸?shù)脑,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正,F(xiàn)象。個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。
重發(fā)標準
1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā);
2.收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā);
3.收到細胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā);
4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā);
5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實后,重發(fā);
6.細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā);
7.視具體情況而定。
不予重發(fā)
1.客戶操作造成細胞污染,不重發(fā);
2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4.細胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā);
5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā);
6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā);
7.視具體情況而定。