傳代方法	第一次建議1:2傳代	細胞來源	ATCC
細胞描述	STR鑒定正確 這是一個帶有8：21號染色體轉位的白血病細胞株。這個轉位使得AML1基因和ETO (或稱MTG8)基因串聯，使融合基因AML1-ETO (也稱作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表達升高，因而細胞產生嵌合的AML1-ETO蛋白。這個蛋白下調CEBPA mRNA，蛋白和DNA的結合活性，而這種結合對粒性白細胞的分化是極端重要的。這株細胞建立于一位急性白血病患者的外周血。這株細胞髓過氧化物酶陽性，顯示其髓性成熟的形態(tài)。 增生試驗顯示，培養(yǎng)的細胞對IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF有反應，但IL-1或IL-5沒有反應。 注意事項： a) 該細胞復蘇后成活率較低，會出現大量死細胞和死細胞碎片，培養(yǎng)兩周后有所好轉。建議每1-2周對細胞進行1000rpm， 5mins離心，棄掉上清，加入新鮮完全培養(yǎng)液，可以去掉部分細胞碎片和顆粒。培養(yǎng)過程中會出現死細胞和細胞碎片，收到郵寄的活細胞的用戶若發(fā)現培養(yǎng)物內有部分死細胞和細胞碎片，此為正�，F象。 b) 細胞培養(yǎng)過程中會有輕微聚團，輕輕吹打開即可。當細胞密度較大或者培養(yǎng)液變黃時，需要及時進行半換液或者完全換液。 c) 該細胞對血清質量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進口大品牌優(yōu)質血清進行培養(yǎng)。 d) 請注意保持細胞密度在合適的范圍（3x105 ~ 3x106 /ml），不能過稀。 本庫的細胞僅用于科研工作，未經許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。
培養(yǎng)備注	用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng)

細胞收到后處理

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）

細胞培養(yǎng)步驟

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

三、細胞凍存：（注：非無血清凍存液方法，無血清凍存液方法請參考我司官網貨號：C7001）

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；

4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。