細(xì)胞名稱：H9

細(xì)胞描述：人胚胎干細(xì)胞，曾用名WA09

形 態(tài)：球形克隆，貼壁生長(zhǎng)

來(lái)源性別：女性

組織：內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

凍存日期/代數(shù)：詳見(jiàn) 凍存管/培養(yǎng)瓶 標(biāo)識(shí)

建議復(fù)蘇培養(yǎng)體系：1 個(gè) T25 培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿

細(xì)胞狀態(tài)：良好

支原體檢測(cè)結(jié)果：陰性

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

STR鑒定結(jié)果：

Amelogenim：X

D5S818：11，12

D13S317：9

D7S820：9，11

D16S539：12，13

vWA：17

THO1：9

TPOX：10,11

CSF1PO：11

H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞

1.試劑和材料

H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基試劑盒

成分	規(guī)格	數(shù)量	儲(chǔ)存條件
H9細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基	500mL	1瓶	2-8℃
H9細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑	5mL復(fù)溶	1支	-20℃

所需的其它試劑和材料

產(chǎn)品	規(guī)格
Y27632	1mg
Matrix	5mL
H9細(xì)胞消化液	500mL
另需細(xì)胞培養(yǎng)皿/瓶/板，15mL離心管和移液管等細(xì)胞培養(yǎng)耗材

2.培養(yǎng)流程

2.1.復(fù)蘇

在開(kāi)始復(fù)蘇前，將所有試管、預(yù)熱后的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿準(zhǔn)備好，已確保盡快完成復(fù)蘇過(guò)程。

1. 將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續(xù)地?fù)u動(dòng)凍存管，直到只剩下一個(gè)小冷凍團(tuán)。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進(jìn)行消毒。

2. 使用移液管將凍存管中含有H9細(xì)胞的凍存液輕輕轉(zhuǎn)移至一個(gè)含有5-6mL已經(jīng)預(yù)熱的完全培養(yǎng)基的15mL離心管中，過(guò)程必須輕柔防止吹散細(xì)胞團(tuán)。

3. 室溫300g離心5min。

4. 吸出培養(yǎng)基，確保細(xì)胞團(tuán)完整。

5. 然后緩慢加入1mL完全培養(yǎng)基，用手指輕彈離心管底部，使細(xì)胞團(tuán)脫離底部并分散。

6. 輕輕的將此1mL細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至已包被的培養(yǎng)皿/板/瓶，根據(jù)最終培養(yǎng)細(xì)胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。

7. 將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預(yù)熱）。

2.2.傳代

當(dāng)集落變得較大、中心變得密集、明亮（對(duì)比邊緣），相鄰的集落開(kāi)始融合時(shí)，此時(shí)可進(jìn)行傳代。

1. 傳代前， 準(zhǔn)備 37 ℃預(yù)熱好的好無(wú)鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。

2. 吸走上清，并加入 37℃預(yù)熱好的 PBS 溶液清洗1次。

3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預(yù)熱好的消化液。

4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開(kāi)始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞成團(tuán)脫落。

5. 加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。

6. 移入離心管，300g離心5min，

7. 離心后重懸（重懸步驟參照復(fù)蘇4-5步）。

8. 傳代比例為 1：6—1：8，根據(jù)最終培養(yǎng)細(xì)胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。

9. 將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預(yù)熱）。

2.3.凍存

當(dāng)集落變得較大、中心變得密集、明亮（對(duì)比邊緣），相鄰的集落開(kāi)始融合時(shí)，此時(shí)可進(jìn)行傳代。

1. 傳代前， 準(zhǔn)備 37 ℃預(yù)熱好的好無(wú)鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。

2. 吸走上清，并加入 37℃預(yù)熱好的 PBS 溶液清洗1次。

3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預(yù)熱好的消化液。

4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開(kāi)始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞成團(tuán)脫落。

5. 加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。

6. 移入離心管，300g離心5min。

7. 離心后重懸（重懸步驟參照復(fù)蘇4-5步）。

8. 使用預(yù)冷的凍存液輕輕的重懸細(xì)胞團(tuán)，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管，凍存按 6 孔板每孔凍 1 支，6cm 皿凍 2-4 支，10cm 皿凍 6-12 支（凍存液為：90%H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基與 10%的DMSO。

注意事項(xiàng)

 

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊�，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。