一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
英文名稱
Hmc-1
中文名稱
人肥大細(xì)胞
生長特性
圓形、懸浮
凍存條件
無血清凍存液
培養(yǎng)體系
IMDM+10%FBS
傳代方法
1:2-1:3,第一次建議1:2傳代
傳代情況
2~3天換液/傳代
備注
來源52歲男性肥大細(xì)胞白血病患者的外周血樣本。
STR鑒定正確
該細(xì)胞有多重亞型分別為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細(xì)胞功能研究，因為它們表現(xiàn)出組織肥大細(xì)胞的許多關(guān)鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細(xì)胞表面抗原譜的表達 （1,2）。受體酪氨酸激酶KIT在肥大細(xì)胞上表達，在肥大細(xì)胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT中的激活突變與肥大細(xì)胞生長失調(diào)有關(guān)，并與肥大細(xì)胞腫瘤和系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增多癥有關(guān)。據(jù)報道，HMC-1細(xì)胞系中存在兩個KIT激活點突變 。這兩種突變都將受體轉(zhuǎn)化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態(tài)，導(dǎo)致生長因子非依賴性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2（HMC-1（560,816））是HMC-1 細(xì)胞系的兩個變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時具有 V560G 和D816V 突變，并且表現(xiàn)出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人認(rèn)為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于D816V突變。
STR位點：AmelogeninX：CSF1PO：10,13;D2S1338：17,25;D3S1358：15;D5S818：12,13;D7S820：10,11;D8S1179：12 ;D13S317：10,11;D16S539：10,12;D18S51：14,20;D19S433：14;D21S11：29;FGA：18,20;Penta D：11;Penta ：E9,19;TH01：7,9.3;TPOX：8,11;vWA：17,19
來源：DSMZ；ACC-283 - Discontinued
二、細(xì)胞收到后處理
收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行售后的依據(jù)。
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
3）細(xì)胞凍存：
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。
