描述：RAPA HiFi DNA 聚合酶，其來(lái)源于高保真 DNA 聚合 酶， 并加入了增強(qiáng)的延伸結(jié)構(gòu)， 使其具有超保真性能(~280 倍 Taq)、長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力、高產(chǎn)量。長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力， 使用 該酶可輕松擴(kuò)增 8kb 的基因組 DNA 、20kb 的 λDNA、8kb 的 cDNA。該酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、強(qiáng) 3’-5’的外切酶活性， 產(chǎn)物為平末 端。
包裝：
1ml
1 ml×10
特點(diǎn)和用途
(1) 超保真擴(kuò)增： ~280 倍 Taq 的保真性能， 是載體構(gòu)建、點(diǎn) 突變、 NGS 模板擴(kuò)增、基因合成的最佳用酶。
(2) 快速擴(kuò)增： 具有 6kb/min 的擴(kuò)增能力。
(3) 長(zhǎng)片段擴(kuò)增： 質(zhì)粒、λ DNA 等簡(jiǎn)單模板可以有效擴(kuò) 增>20 kb，基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb ，cDNA 可以有效擴(kuò) 增>8kb。
儲(chǔ)存： 長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置 于 4°C (3 個(gè)月)保存。
使用方法
1. 按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻：
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
| 上游引物(10 μM) | 1 μl |
| 下游引物(10 μM) | 1 μl |
| 模板 DNA | 1-250 ng |
| ddH2O | up to 25 μl |
*模板 DNA 用量參數(shù)(25 μl 反應(yīng)體系)
5-250 ng Genomic DNA
模板 DNA
(目的片段≤20kb)
1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)
(1)擴(kuò)增片段<5kb 時(shí)采用如下程序
| 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時(shí)間 |
| 1st Cycle | 95°C | 1min |
|
| 95°C | 30s |
| 25-35 Cycles | 50~60°C 72°C | 30s 6kb/min |
| Last Cycle | 72°C | 2min |
| (2)擴(kuò)增片段>5kb 時(shí)采用如下程序 | ||
| 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時(shí)間 |
| 1st Cycle | 92°C | 1min |
|
25-35 Cycles | 92°C 50~60°C 72°C | 10s 30s 2-3kb/min |
| Last Cycle | 72°C | 2min |
3. 電泳： 1% 瓊脂糖凝膠電泳， 上樣 5 μl，電泳結(jié)束在紫外 燈下檢測(cè)條帶。
4. 注意事項(xiàng)： (1) 當(dāng)模板 GC 含量>65%時(shí)，請(qǐng)?zhí)砑?/span>
5× Q-Solution (Cat. No.: A3002)。(2)當(dāng)擴(kuò)增片段<1kb 時(shí)， 延伸時(shí)間可直接使用 15s ，當(dāng)擴(kuò)增片段>5kb 時(shí)，按照 2-3kb/min 的延伸時(shí)間進(jìn)行設(shè)置，能獲得更高的產(chǎn)量。(3) 由于不同的 PCR 管其導(dǎo)熱性能有所不同， 通常 PCR 采用 25μl 體系可以獲得更高的產(chǎn)量。
