| 本試劑采用穩(wěn)定高效的RT-PCR預(yù)混體系，是以RNA為模板進(jìn)行一步法RT-PCR的專用試劑。其原理為用基因特異性引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得第一鏈cDNA（不可使用Oligo（dT）或Random Rimer合成第一鏈cDNA），再使用基因特異性正向引物和反向引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在同一反應(yīng)體系中一步完成從反轉(zhuǎn)錄到PCR的全部過程。反應(yīng)體系中已含有電泳所需的指試劑（藍(lán)色和黃色），反應(yīng)后可以直接進(jìn)行電泳。 在本試劑中，將耐熱M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、Rnase Inhibitor、Hotstart高保真DNA聚合酶以及穩(wěn)定劑等配制成50×One-Step Enzyme Mix預(yù)混液；反應(yīng)Buffer、dNTP以及電泳指示染料配制成5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因此使得操作更加簡(jiǎn)單便，擴(kuò)增產(chǎn)物可用于平端克隆和DNA測(cè)序。 | |||||||||||||||||
組分 | |||||||||||||||||
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| 注意：1.50×One-Step Enzyme Mix粘度高，第一次使用之前要離心收集至反應(yīng)管底部，吸取時(shí)應(yīng)緩慢小心。 2.由于使用了Hotstart高保真DNA聚合酶，反應(yīng)配制可在常溫進(jìn)行，但各組分應(yīng)-20°C保存。 | |||||||||||||||||
主要特征 | |||||||||||||||||
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儲(chǔ)存 | |||||||||||||||||
| 請(qǐng)置于-20°C，可保存2年；避免反復(fù)凍融。 | |||||||||||||||||
實(shí)例 | |||||||||||||||||
| 1.以Hela細(xì)胞總RNA為模板，使用HiFi One Step RT PCR Mix擴(kuò)增不同長(zhǎng)度的目的片段。電泳結(jié)果顯示，166bp～4128bp 的 DNA 片段都得到了良好的擴(kuò)增。 | |||||||||||||||||
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| M：D10000 DNA Marker，1-7分別為：β-actin(166bp)、GAPDH (552bp)、GAPDH(960bp)、BMP2 (1574bp)、PRKN (1705bp)、TFRC (2755bp)和TFRC( 4128bp)。 | |||||||||||||||||
| 2. 以Hela細(xì)胞總RNA為模板，使用不同的RNA模板量（1 ng、10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、600 ng、800 ng、1 μg）進(jìn)行HiFi One Step RT PCR Mix擴(kuò)增。電泳結(jié)果顯示，三種不同長(zhǎng)度的片段都獲得良好的擴(kuò)增，過多的模板可能會(huì)抑制擴(kuò)增。 | |||||||||||||||||
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| M：D10000 DNA Marker，1-9分別為1 ng、10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、600 ng、800 ng、1 μg的 RNA模板擴(kuò)增產(chǎn)物。 | |||||||||||||||||
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